Zwittermicin A生物合成基因簇的研究

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:garnettxin
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  本文对国内一批Bt菌株进行了筛选;对影响ZwittermicinA生成和活性的条件进行了探索;对Bt菌株G03的ZwittermicinA合成基因簇进行了克隆、分析、及部分开放阅读框的功能验证。   本文采用PCR与抑菌活性相结合的方法对国内196株Bt菌株进行筛选,有67株菌有抑菌活性,其中21株抑菌活性明显高于其余的46株,选用营养程度不同的培养基对Bt菌株G03进行培养、结合菌体观察和培养液上清液活性测定,证明ZwittermicinA的生成与芽孢的产生无依赖关系;通过测定超声波处理前后的上清液的抑菌活性差异,证明ZwittermicinA的生成和分泌之间有时间的延迟;并测定了不同pH值对ZwittermicinA抑菌活性的影响,发现其在中性偏碱的环境中活性较高。   本文构建了Bt菌株G03基因组的BAC文库,该文库包含4713个克隆,平均插入片断大小为73kb,该文库相当于59个库容量。采用PCR方法对该库的1000个克隆进行筛选,得到4个阳性克隆,其中两个阳性克隆包含已发表的16kbZwittermicinA合成基因簇。   本研究为进一步开展ZwittermicinA同Bt增效作用及其分子机制的研究提供了有力的保障,并为进一步解析ZwittermicinA的合成途径提供了依据。
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