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背景:胰腺癌是最具侵袭性的癌症之一,经过大量的努力,胰腺癌的早期诊断有了很大的提高,但总体诊断率还是很低,胰腺癌的预后仍未得到明显的改善,五年生存率仅有8%。因此,对其肿瘤分子生物学的研究有助于进一步揭示其发生、发展机制,有助于早期诊断和治疗。miRNAs(MicroRNA)是近来肿瘤分子生物学研究的一个热点,虽然很多胰腺癌的研究提示miR-23a是一种致癌调节因子,但其潜在的分子机制依旧不明。PLK-1(Polo样激酶1)在多种细胞内有丝分裂进程中起到至关重要的作用,许多miRNAs抑制PLK-1的表达,从而抑制肿瘤的发展。前期的预实验研究结果显示miR-23a抑制胰腺癌细胞MIA-PaCa-2的增殖,靶基因预测软件推测miR-23a与PLK-1可能存在靶向关系。考虑到miRNAs和PLK-1的重要作用,有必要对其进一步的研究。目的:1、研究miR-23a和PLK1在人胰腺癌组织和细胞株中表达水平,并探讨两者的相关性。2、研究miR-23a对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭、以及凋亡的影响。3、研究miR-23a靶向PLK-1抑制胰腺癌细胞增殖的相关机制。方法:1、荧光定量PCR检测miR-23a和PLK-1在对胰腺癌与癌旁组织和4种胰腺癌细胞株中的表达情况。构建miR-23a和PLK-1的过表达/干扰质粒,荧光素酶报告基因方法证明PLK-1是miR-23a直接调控的靶基因。2、选取人胰腺癌细胞株MIA-PaCa-2和Panc-1,CCK8法检测转染后细胞增殖能力的变化;Transwell实验检测转染后细胞侵袭能力的变化;流式细胞仪检测转染后细胞凋亡的变化。建立MIA-PaCa-2细胞的裸鼠皮下异种成瘤模型,验证miR-23a对胰腺癌细胞成瘤能力的影响。3、选取人胰腺癌细胞株MIA-PaCa-2,转染miR-23a、PLK-1以及共转染miR-23a和PLK-1,Transwell实验检测后细胞侵袭能力的变化;流式细胞仪检测转染后细胞凋亡的变化。荧光定量PCR检测体内成瘤试验中miR-23a对PLK-1不表达的影响。最后,Western Blot检测转染后细胞中PLK-1以及其下游信号因子Bax、Bcl2、cyclinB1,E-cadherin、Vimentin 蛋白表达变化。结果:1、20对组织中,胰腺癌组织中miR-23a表达高于相应癌旁组织的有19对,PLK-1表达高于相应癌旁组织的有11对。在人胰腺癌细胞株中,miR-23a和PLK-1表达水平均明显升高,两者的表达水平呈负相关。双荧光素酶实验证明PLK-1是miR-23a直接调控的靶基因。2、与对照组相比,MIA-PaCa-2细胞的miR-23a的过表达组细胞增殖能力减弱,细胞迁移和侵袭能力减弱,细胞凋亡明显增强,而Panc-1细胞结果与MIA-PaCa-2细胞相反。动物实验结果表明MIA-PaCa-2细胞的miR-23a的过表达组的肿瘤体积和瘤重明显减小,抑瘤率明显增加。3、MIA-PaCa-2细胞过表达PLK-1组与对照组相比,细胞迁移和侵袭能力增强,细胞凋亡明显减弱;共转染miR-23a和PLK-1组结果与对照组相似。裸鼠成瘤实验MIA-PaCa-2细胞转染miR-23a后,导致PLK-1表达的下调,进而导致其下游信号通路因子BCL-2,CyclinB1 and Vimentin表达的下调,以及Bax and E-cadherin表达的上调。而转染过表达PLK-1载体后,结果却相反。体内实验中,当miR-23a多表达时,PLK-1的表达明显抑制。结论:1、miR-23a在胰腺癌组织和胰腺癌细胞中高表达,在胰腺癌细胞株中,miR-23a与PLK-1的表达呈负相关性,PLK-1是miR-23a直接调控的靶基因。2、miR-23a抑制胰腺癌细胞MIA-PaCa-2增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,而Panc-1细胞却相反。3、miR-23a通过靶向PLK-1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。