【摘 要】
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猪葡萄球菌(Staphylococcus hyicus,S.hyicus)是猪渗出性皮炎(exudative epidermitis,EE)的病原,可以引发仔猪皮肤脱落甚至脱水死亡。该病一直影响着全球养猪业的发展,目前对于猪渗出性皮炎在中国的流行情况以及血清型的研究尚不清楚,对该病的感染也缺乏有效的防治措施。本研究对猪渗出性皮炎的流行病学、致病性、诊断方法及灭活疫苗进行了研究,以期为我国渗出性皮炎
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猪葡萄球菌(Staphylococcus hyicus,S.hyicus)是猪渗出性皮炎(exudative epidermitis,EE)的病原,可以引发仔猪皮肤脱落甚至脱水死亡。该病一直影响着全球养猪业的发展,目前对于猪渗出性皮炎在中国的流行情况以及血清型的研究尚不清楚,对该病的感染也缺乏有效的防治措施。本研究对猪渗出性皮炎的流行病学、致病性、诊断方法及灭活疫苗进行了研究,以期为我国渗出性皮炎的诊断、防控提供理论支持。为了解猪葡萄球菌在广东地区的流行情况,本研究从广东省九个市区采集了32份疑似患有渗出性皮炎的病料,通过细菌形态、培养特性、生化特性及PCR鉴定分离出5类具有毒性的葡萄球菌,80%为猪葡萄球菌。对猪葡萄球菌脱落毒素检测发现,Exh A型占比为30%,Exh B型占比15%,Exh C型占比16%,没有检出Exh D型菌株。并以分离到的CK-1菌株作为代表菌株,开展了细菌生长特性、耐药性等研究。结果表明该菌株在营养肉汤培养及LB培养基中生长良好,培养16h活菌数达到最高。药敏试验发现该菌对青霉素、链霉素耐药,对头孢类较敏感,能够分泌脱落毒素Exh A,动物试验显示该菌对小鼠及仔猪都有致病性。为了研究猪葡萄球菌的致病性,以CK-1菌株为代表,分别开展了该菌对小鼠以及仔猪感染的研究,不同注射方式感染小鼠试验表明,腹腔注射1.25x10^10CFU的猪葡萄球菌可以引起小鼠死亡,相同剂量皮下注射只引起注射部位皮肤脱落;10日龄仔猪较35日龄仔猪易感,仔猪最小发病剂量为2.0x10^8CFU。为了建立猪葡萄球菌抗体检测方法,本试验以CK-1菌株基因为模板构建了猪葡萄球菌的脱落毒素Exh A的可溶性表达载体p Cold TF-Exh A,并且分离纯化的蛋白可以引起仔猪发病,具有较好的生物学活性。利用纯化的蛋白作为抗原建立了ELISA检测方法,同时以猪葡萄球菌灭活菌体为抗原建立凝集试验检测方法,二者都有很好的特异性和重复性,可用于猪葡萄球菌抗体检测。本研究对猪葡萄球菌的纳米佐剂灭活疫苗进行了初步的研究,安全性试验结果显示该疫苗对仔猪及妊娠母猪都没有副作用,4℃可以储存5个月。疫苗免疫后35d抗体水平达到最高,免疫保护试验显示对仔猪免疫2ml保护力可达到100%。本研究为了解广东地区猪葡萄球菌的流行情况提供数据支持,掌握了猪葡萄球菌的生物学特性及致病特点,抗体检测方法的建立以及灭活疫苗的研究,为猪葡萄球菌的检测防控提供了参考。
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