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目的:研究经血宁胶囊止血作用的相关药效及其机制,比较经血宁胶囊(醇提物)和经血宁胶囊原剂型(水提物)两者凝血作用的差异,为进一步研究开发经血宁胶囊新制剂提供科学依据。
方法:
1.凝血试验:(1)经血宁胶囊对凝血时间(coagulationtime,CT)的影响(载玻片法和毛细玻管法);(2)经血宁胶囊对新西兰兔兔凝血酶时间(thrombintime,TT)、凝血酶原时间(prothrombintime,PT)、活化部分凝血活酶时间(activatedpartialthromboplastintime,APTT)、纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)的影响;(3)测定血小板计数(platelet,PLT)和血浆复钙时间(plasmarecalcificationtime,PRT),并与经血宁胶囊原剂型比较,观察两者凝血作用的差异。
2.对大鼠药物性流产子宫出血的影响:(1)动物子宫出血模型治疗试验:建立药物性流产大鼠子宫出血模型,观察经血宁胶囊对药物性流产大鼠子宫出血总量以及子宫重量的影响;对大鼠子宫重量的影响;采用ELISA法测定大鼠前列腺素(PGF2a)及大鼠血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平;用苏木精一伊红(HematoxylinandEosinStaining,HE)染色,光镜下观察子宫组织形态结构变化;(2)经血宁胶囊对新西兰兔离体子宫平滑肌收缩的影响。(3)经血宁胶囊对新西兰兔主动脉血管舒缩功能影响的试验。
3.抗炎镇痛实验:(1)经血宁胶囊对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响试验(容积测量法),计算足跖炎症肿胀程度;(2)采用小鼠耳廓肿胀法,观察经血宁胶囊对二甲苯所致小鼠急性炎症模型的影响;(3)采用腹腔染料渗出法观察经血宁胶囊对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响。(4)采用缩宫素造成小鼠痛经模型,计算扭体次数,评价经血宁胶囊镇痛作用;(5)采用光电管法观察经血宁胶囊对小鼠镇静作用的影响。
4.影响免疫功能实验:(1)采用环磷酰胺复制小鼠免疫低下模型,用碳粒廓清法测定单核吞噬细胞数量;用比色法测定血清溶血素抗体水平,评价经血宁胶囊对免疫功能的影响。
5.急性毒性试验:测定小鼠最大耐受量(Maximaltolerancedose,MTD),计算MTD的倍数,了解经血宁胶囊急性毒性范围。
结果:
1.经血宁胶囊醇提物高、中剂量组和云南白药均能缩短凝血时间与空白对照组比较有明显差异(P<0.05),与经血宁胶囊水提物比较无显著性差异。经血宁胶囊醇提物高、中、低剂量均能明显缩短PT,APTT,TT,提高血浆Fbg,与空白对照组比较(P<0.05或P<0.01)。经血宁胶囊水提物组PT,APTT,TT,Fbg与空白对照组比较P<0.05。经血宁胶囊(醇提物)高剂量组APTT,TT与原剂型(水提物)比较有显著性差异,表明其凝血作用优于经血宁胶囊原剂型。经血宁胶囊醇提物高剂量和云南白药均可增加PLT数量,与空白对照组比较(P<0.01)。醇提物与水提物之间无统计学差异。经血宁胶囊醇提物可缩短自加Ca2+至纤维蛋白形成的时间即PRT,与空白对照组比较(P<0.01)。经血宁胶囊醇提物高剂量组与水提物比较(P<0.05)。
2.经血宁胶囊可减少米非司酮+米索前列醇所致的药物性流产大鼠子宫出血的总量(7天),而且有一定的量效关系,随着时间的推移每天子宫出血量逐渐减少,给药组与空白组比较,7天内药物流产性大鼠子宫每天出血量均呈减少趋势,原剂型、高、中、低剂量曲线下降幅度依次减小,说明经血宁胶囊减少子宫出血量作用明显。经血宁胶囊对大鼠PGF2a水平的影响与模型组比较有显著性差异(高剂量P<0.01;中剂量P<0.05);经血宁胶囊高剂量对大鼠AngⅡ水平的影响与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。提示其止血作用机制可能与影响PGF2a和AngⅡ水平有关。经血宁胶囊高剂量子宫平滑肌张力与原剂型比较有显著性差异(P<0.01),子宫平滑肌收缩曲线图形剪辑及分析显示,子宫收缩频率、振幅和张力均提高,表明经血宁胶囊对家兔离体子宫平滑肌具有较好的收缩作用。经血宁胶囊对家兔离体主动脉血管无明显作用。
3.经血宁胶囊对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀有较明显的抑制作用,经血宁胶囊三个剂量致炎后300min、360min足跖肿胀度抑制率最大,与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01),与经血宁胶囊原剂型比较差异不显著。经血宁胶囊中剂量对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀有较明显的抑制作用,耳廓肿胀度与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01)。经血宁胶囊高、中、低剂量抑制率分别为52.42%、37.84%、29.12%。经血宁胶囊对醋酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性增加有抑制作用,经血宁胶囊高、中、低剂量组的腹腔洗出液OD值分别与空白对照组比较有显著性差异(P<0.05)。用药组的小鼠自主活动次数与空白对照组比较有减少趋势,抑制率为20.9%,表明有一定的镇静作用。经血宁胶囊对由缩宫素所致的小鼠痛经模型无明显作用。
4.与模型组比较,左旋咪唑和经血宁胶囊高剂量均可显著提高免疫低下模型小鼠廓清指数水平(P<0.05),与原剂型组比较无显著性差异。小鼠血清溶血素含量,经血宁胶囊中剂量与模型组比较有显著性差异(P<0.01),与原剂型比较也有显著性差异(P<0.01)。
5.小鼠灌胃(ig)给予经血宁胶囊180g药材/kg,相当于人临床日用量的250倍(按人用量36g药材/日/人(60kg)计算),未见有明显的毒性反应。
结论:
1.经血宁胶囊具有明显缩短凝血时间作用。
2.经血宁胶囊对药物性流产大鼠子宫总出血具有较好的止血作用,并可升高药物性流产大鼠PGF2a和AngⅡ水平,这可能是其止血作用机制之一。
3.经血宁胶囊对家兔离体子宫平滑肌具有较好的收缩作用,其收缩强度与剂量呈正相关。经血宁胶囊对家兔离体主动脉血管无明显作用。
4.经血宁胶囊对化学物质所致的炎症有较好的抗炎镇痛作用。
5.经血宁胶囊提高免疫低下模型小鼠廓清指数和血清溶血素水平,提示可影响免疫功能。
6.经血宁胶囊MTD为180g药材/kg,相当于人临床日用量的250倍表明毒性低。
综上所述,经血宁胶囊有显著的止血、抗炎、免疫增强等作用,醇提物优于原剂型水提物,而且毒性低。