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目的本研究旨在探讨沉默ERCC1基因后顺铂、紫杉醇、培美曲塞单药或者联合用药作用对非小细胞肺癌细胞产生的影响。方法利用TCGA数据库中的数据,比较肺鳞癌和肺腺癌与其对应的癌旁组织中ERCC1基因的表达水平。使用RT-PCR技术筛选ERCC1高表达肺癌细胞株。构建ERCC1 siRNA慢病毒载体LV-ERCC1-siRNA1和LV-ERCC1-siRNA2,并将其转染A549细胞。Western blot技术检测细胞中ERCC1的蛋白表达水平,确认转染是否成功。为了确定ERCC1基因的表达与细胞对顺铂,紫杉醇和培美曲塞的药物敏感性之间的关系。将化疗药物顺铂,紫杉醇和培美曲塞采用单独用药或者联合用药分别处理转染慢病毒的A549细胞,并使用CCK法和集落形成实验测定细胞存活率和细胞集落形成能力。结果1本研究分析了TCGA数据库中535例肺腺癌和59例对应的癌旁组织中ERCC1的表达水平,结果发现,ERCC1基因在肺腺癌组织中的表达水平(中位数为2082)远远高于其在癌旁组织中的表达水平(中位数为1274),差异具有统计学意义(Z=-4.901,P=0.001)。ERCC1基因在肺鳞癌组织(502例)中的表达水平(中位数为3004)和其在癌旁组织(49例)中的表达水平(中位数为2721)没有统计学差异(Z=-1.643,P=0.100)。2 ERCC1在三株非小细胞肺癌细胞A549、NCI-H23和NCI-H2030细胞中的相对表达量分别为0.16±0.017、0.037±0.01和0.026±0.001。可以发现,在A549细胞ERCC1 m RNA表达水平较高。3 A549细胞转染LV-ERCC1-siRNA1和LV-ERCC1-siRNA2慢病毒后,ERCC1表达水平显著降低。4 CCK法检测不同化疗方案处理肺癌细胞后细胞增殖情况,结果如下:使用单药(顺铂、紫杉醇和培美曲塞)处理转染慢病毒的肺癌细胞后,ERCC1沉默组(转染LV-ERCC1-siRNA1或LV-ERCC1-siRNA2慢病毒)的细胞存活率均低于对照组(转染对照LV-NC-siRNA慢病毒载体),差异有统计学意义(P<0.05)。对于联合用药组,将肺癌细胞用固定浓度的顺铂(2μM)和一定浓度梯度的紫杉醇(0,2,4,6,8和10n M)联合处理72小时后,检测细胞存活率。LVA549-siRNA1和LV-A549-siRNA2 ERCC1转染组的最低细胞存活率为(40.47±5.1)%和(37.86±1.22)%显著低于LV-NC-siRNA对照慢病毒转染组(57.34±5.81)%;将肺癌细胞用固定浓度的顺铂(2μM)和一定浓度梯度的培美曲塞(0,2,4,6,8和10μM)联合处理72小时后,检测细胞存活率。LV-A549-siRNA1和LV-A549-siRNA1 ERCC1转染组的最低细胞存活率为(32.52±1.46)%和(33.53±1.26)%,显著低于LV-NC-siRNA对照慢病毒转染组(40.99±1.79)%;将肺癌细胞用固定浓度的紫杉醇(2n M)和一定浓度梯度的顺铂(0,2,4,6,8和10μM)联合处理72小时后,检测细胞存活率。LV-A549-siRNA1和LV-A549-siRNA1 ERCC1转染组的最低细胞存活率为(21.01±0.25)%和(21.92±0.27)%,显著低于LV-NC-siRNA对照慢病毒转染组(34.32±1.07)%;将肺癌细胞用固定浓度的培美曲塞(2μM)和一定浓度梯度的顺铂(0,2,4,6,8和10μM)联合处理72小时后,检测细胞存活率。LV-A549-siRNA1和LV-A549-siRNA1 ERCC1转染组的最低细胞存活率为(20.71±0.23)%和(18.96±1.85)%,显著低于LV-NC-siRNA对照慢病毒转染组(36.65±0.32)%。5集落形成实验结果显示,顺铂、紫杉醇和培美曲塞单独和联合用药均能抑制细胞集落形成能力,且ERCC1沉默组细胞集落形成能力均低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论沉默ERCC1基因可以提高A549肺癌细胞对顺铂、紫杉醇和培美曲塞三种药物单独用药和联合用药的药物敏感性。