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蛹虫草Cordyceps milltaris是当前用于功能食品和药物开发上较受国内外关注的真菌之一。现代医学研究表明虫草菌素(cordycepin)是其重要的生物活性成分,用现代生物技术手段大规模深层培养蛹虫草生产虫草菌素具有重要的应用价值。 本论文以蛹虫草的无性型,蛹草拟青霉Peacilomyces milltaris CM8菌株为菌种,研究了提高虫草菌素产量的深层培养工艺。 通过一次一因素法,优化了深层培养蛹虫草生产虫草菌素的营养条件和环境条件。 通过正交实验设计,优化了生产虫草菌素各营养因子的最佳配比。 首次确定了前体腺苷的最佳接入时间和接入量。在发酵的第8d接入750mg/1的腺苷,摇瓶培养到第17d,可使CM8菌株胞内虫草菌素含量从对照的7.49 mg g-1提高到10.87mg g-1(增幅为45.13%),胞外虫草菌素含量从对照的610.33 mg 1-1提高到774.99 mg 1-1(增幅为26.98%)。 本文首次研究了蛹虫草发酵过程中腺苷与虫草菌素间的动态关系。发酵液中的腺苷浓度变化较大,当腺苷分泌到发酵液中时,一部分腺苷又重新被迅速吸收转化成虫草菌素,生成的虫草菌素一部分被分泌到发酵液中,一部分继续在胞内积累。 CM8菌株产虫草菌素的最佳发酵工艺是:于PDA斜面上,26℃,8d,活化2次;接入蛋白胨2%,蔗糖2%,MgSO4·7H2O 0.05%,KH 2PO4 0.1%的液体种子培养基中,130rpm,26℃,摇瓶培养84h,得液体母种;以4%的量接入4%蔗糖,1.5%蛋白胨,0.05%MgSO4·7H2O,0.05%K2HPO4,4.0mg 1-1NAA的培养基中,190rpm,26℃,起始pH5.0,摇瓶培养17d,CM8菌株胞外虫草菌素产量达到961.21 mg 1-1,胞内虫草菌素的含量达到12.87mg g-1;胞外和胞内虫草菌素的产量分别比未优化前增加了0.5倍和一倍。应用同样的条件在501气升式发酵罐中,通气率为1vvm时,胞内虫草菌素的含量达到10.57mg g-1,胞外虫草菌素的产量460.36 mg 1-1。