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F-20-7是西北农林科技大学葡萄酒学院2003年获得的以葡萄酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)1450和酒酒球菌(Oenococcus oeni)SD-2a为亲本的跨界融合子。由于相关基因融合到了细胞器上,造成该融合子的降酸稳定性较差,生产中需要筛选降酸效果好的融合子进行保存和扩培。本研究根据前人研究成果,继续对跨界融合在葡萄酒降酸微生物育种中的可行性进行了考察;同时为了得到遗传性能更加稳定的融合子,从F-20-7出发,继续与亲本酒酒球菌SD-2a进行融合,以期获得降酸效果更加优良且遗传性能更加稳定的融合子。主要研究内容与结论如下:1.对实验室保藏的9株SD系列酒酒球菌进行降酸试验,确定SD-2a的优良降酸性状保持完好,可以继续作为亲本使用。2.融合子筛选方法——抗药性与营养缺陷型相结合。首先对葡萄酒酵母1450和F-20-7进行抗生素试验,结果显示:50μg/mL放线菌酮可以抑制葡萄酒酵母1450的生长,100μg/mL放线菌酮可以抑制F-20-7的生长,因此将此剂量作为融合子的筛选依据。然后对酒酒球菌进行不同培养基培养试验,确认其生长必需因子——番茄汁,此物质作为融合子营养缺陷型筛选依据。综上结果再生培养基设计为添加一定量放线菌酮的YPD培养基,以保证再生平板上长出的菌落是融合子。3.通过单因素试验和正交试验,确定双亲菌株原生质体制备的最佳条件。其中葡萄酒酵母1450为:菌龄12h、0.3%?-巯基乙醇作为预处理剂、1.5%蜗牛酶作为工具酶、酶解温度为32℃、酶解时间90min、再生培养基采用添加0.7mol/L的KCl的高渗YPD再生培养基,原生质体形成率与再生率之积达到12.40%;酒类酒球菌原生质体制备条件为:菌龄20h、青霉素G钠浓度0.5μg/mL、酶浓度1.0 mg/mL、酶解时间30min,原生质体形成率与再生率之积达到20.86%。4.对葡萄酒酵母1450和酒酒球菌SD-2a进行化学融合,融合条件为PEG-4000浓度30%,融合温度:30℃,融合时间30min,再生培养基为添加50μg/mL放线菌酮的HYPD。对F-20-7和酒酒球菌进行电场诱导融合,融合条件为排列频率800KHz,振幅29v,脉冲时间30μs,脉冲次数5次,脉冲延迟时间60×10ms,再生培养基为添加100μg/mL放线菌酮的HYPD。5.对筛选得到的融合子进行降酸试验,通过对苹果酸的降解量和乳酸生成量以及其