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DNA甲基转移酶1(DNMT1)是哺乳动物细胞中含量最多的DNA甲基化转移酶,它在多种肿瘤组织中的表达水平明显上调,其发生往往先于甲基化状态的异常,因而是肿瘤细胞所具有的特征性的早期分子改变。DNMT1主要介导甲基化模式的建立与维护。高表达的DNMT1可以引起甲基化模式发生异常,抑癌基因沉默、原癌基因激活,并导致肿瘤发生。胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,其发病机制仍不清楚,由于缺乏有效的早期诊断与治疗的标记分子,多数患者就诊时已属于进展期,预后较差。本研究将通过检测胃癌组织中DNMT1表达水平、观察DNMT1变化对胃癌细胞增殖、侵袭能力及相关分子表达的影响,探讨DNMT1与胃癌发生发展的关系及部分机制,为进一步丰富胃癌的诊治思路提供理论依据。方法:1.应用Real-time PCR方法检测60对胃癌组织及癌旁正常组织中DNMT1的表达水平。2.构建DNMT1-shRNA慢病毒载体和载体质粒,测定慢病毒的包装和病毒滴度,评价干扰载体对靶基因的干扰效果。转染胃癌细胞MKN45、SGC7901、MKN28,构建DNMT1-shRNA稳定株,并建立慢病毒阴性对照(NC-shRNA)转染靶细胞和未转染细胞株作为对照组。3.细胞增殖实验测定分析转染了DNMT1-shRNA对MKN45、SGC7901、MKN28细胞株及对照组的增殖能力影响。4.Transwell迁移实验分析转染了DNMT1-shRNA对MKN45、SGC7901、MKN28细胞株与对照细胞株的迁移能力。5.使用Western-blotting和Real-time PCR实验检测转染了DNMT1-shRNA对MKN45、SGC7901、MKN28细胞株及对照组中的CDC25B表达情况。结果:1.Real-time PCR检测结果显示,与正常胃粘膜组织相比,胃癌组织中的DNMT1的表达水平显著上调(P<0.05)。60例胃癌组织中52例(86.7%,52/60)DNMT1的表达水平明显高于对应的癌旁组织,其中17例(28.3%,17/60)表达上调2倍以上;伴有淋巴结转移、有癌旁脉管浸润及TNM分期Ⅲ-Ⅳ期的胃癌患者,其DNMT1表达水平明显高于无淋巴结转移、无癌旁脉管浸润及TNM分期I-II期患者(P<0.05)。2.细胞增殖实验:转染了DNMT1-shRNA的胃癌细胞株较对照组的增殖能力明显降低(P<0.05),提示DNMT1可以促进胃癌细胞的增殖。3.细胞迁移实验:干扰DNMT1可以明显抑制胃癌细胞的迁移能力(P<0.05)。4.Real-time PCR及免疫印迹法显示:干扰DNMT1可以明显使胃癌细胞MKN45、SGC7901及MKN28中CDC25B的蛋白表达水平下调,Real-time PCR检测结果也显示干扰DNMT1后可以使胃癌细胞中CDC25B的mRNA表达水平下调,提示CDC25B可能是DNMT1的下游靶基因,DNMT1可能通过调控CDC25B表达影响胃癌的发生与进展。结论:DNMT1在胃癌组织中表达上调,具有促进胃癌细胞增殖和侵袭转移的作用;DNMT1通过调控CDC25B表达可能是影响胃癌发生与进展的机制之一。