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骨组织是一种特殊的钙化组织,其发生和钙化活动主要由成骨细胞完成并受体内多种因素调控。随着体外细胞培养技术的发展,人们已经从许多动物的颅骨、骨髓基质、骨膜及骨外组织中成功培养出了具有典型成骨细胞特性的细胞,研究表明培养出的成骨细胞具有良好的生物学特性,在不同环境下可以形成骨组织,联合支架的应用,构建组织工程骨,将其植入体内修复骨缺损。本文采用酶消化法分离新生大鼠颅盖骨成骨细胞,通过细胞形态学观察及生物学特性的鉴定,建立一种可行的体外培养成骨细胞的方法,为成骨细胞功能机制的体外研究奠定基础。
目的:建立新生大鼠颅盖骨中分离成骨细胞的生物学模型,并对细胞的生物学特性进行观察。并探讨AZ91HP镁合金基体羟基磷灰石涂层材料与成骨细胞的生物相容性。
方法:将新生SD大鼠处死,无菌条件下取出颅骨,剔净后剪碎成泥状,经过0.25%的胰蛋白酶和0.1%混合胶原酶消化后接种于培养瓶中培养,通过观察细胞形态学及HE染色、钙化结节、碱性磷酸酶染色进行鉴定。以空白为对照组,将在体外新生SD大鼠颅骨分离培养的成骨细胞接种于经过处理的AZ91HP镁合金基体羟基磷灰石涂层材料上,通过倒置显微镜及扫描电镜观察成骨细胞与材料的复合情况,并描绘出细胞的生长曲线。
结果:用酶消化法分离的大鼠成骨细胞,在体外培养时可维持其在体内的功能:合成碱性磷酸酶,最终能形成矿化结节。成骨细胞在AZ91HP镁合金基体羟基磷灰石涂层材料上生长良好。
结论:用酶消化法进行大鼠成骨细胞培养,方便易行,可分离、培养大量高纯度成骨细胞,在体外传代后仍保留其表型特征。为骨的发育和成骨细胞生物学的研究提供了模型。AZ91HP镁合金基体羟基磷灰石涂层材料与成骨细胞具有较好的生物相容性。