银环蛇粗毒的分离及其有效组分作用于人神经胶质瘤SWO细胞的研究

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目的:确定银环蛇毒素是否能诱导人神经胶质瘤细胞SWO凋亡,或者只是杀伤作用,以及银环蛇粗毒中使SWO细胞凋亡或杀伤的毒素组分,并对其作用途径进行初步的探讨,从而为神经胶质瘤的理论研究和治疗提供新的工具,同时为蛇毒的开发利用提供理论基础。 方法:采用羧甲基纤维素CM-52阳离子交换层析和Sephadex G-100葡聚糖凝胶对银环蛇粗毒进行分离纯化。用MTT、DNA ladder、流式细胞术、电镜扫描等方法探讨银环蛇粗毒及其有效组分对人神经胶质瘤细胞SWO的作用。 结果:经羧甲基纤维素CM-52柱层析分离纯化得到十个毒素峰,第Ⅲ峰毒素经Sephadex G-100柱进一步分离得到α-银环蛇毒素(α-BTX)。MTT试验结果显示,SWO细胞对银环蛇粗毒、第Ⅲ峰毒素、α-BTX的作用比较敏感,同时SWO细胞的药敏性强于3T3细胞的药敏性,而SWO对其它组分的作用不敏感;三种毒素作用于SWO细胞,均未出现DNA ladder,流式细胞术检测也未见凋亡峰。电镜细胞表面扫描显示,毒素作用后的细胞膜表面有许多小孔,显示毒素对SWO的作用主要是通过直接杀伤,而非引起凋亡。 结论:银环蛇粗毒、第Ⅲ峰毒素、α-BTX对神经胶质瘤细胞都只有杀伤,没有凋亡作用。毒素纯度越高,杀伤作用越强,且杀伤作用与毒素存在浓度依赖关系。三种毒素对神经胶质瘤细胞SWO的杀伤作用明显强于对正常细胞3T3的杀伤作用,说明毒素对细胞的杀伤是有选择性的,可望开发出针对人神经胶质瘤的特异性药物。
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