山西省鸡棘沟赖利绦虫PCR种属鉴定及遗传进化关系、形态学特征研究

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鸡绦虫是寄生于家鸡、火鸡等雉鸡小肠中的寄生虫,鸡通过啄食带有似囊尾蚴的中间宿主而感染鸡绦虫病。基因鉴定是近些年快速发展的一种种属鉴定方法,因其高效、准确和特异性强等优点被广泛用于病毒、细菌和寄生虫等的种属鉴定和遗传变异分析。棘沟赖利绦虫(Raillietina echinobothrida)是最常见的鸡绦虫种类之一,通过单独或与其他种类绦虫混合感染鸡,严重威胁鸡健康和家禽养殖业。山西省是家禽养殖大省,蛋鸡、肉鸡感染棘沟赖利绦虫的现象十分普遍,但目前尚无关于山西省棘沟赖利绦虫种属鉴定及形态学特征的研究。试验提取鸡肠道内单条绦虫总DNA,设计18S rRNA、ITS-2和COX1基因引物并进行PCR扩增。试验对目的基因PCR产物进行胶回收,连接到p MD19-T载体,转化入DH5α菌株后对目的基因进行测序。试验将目的基因序列与NCBI数据库已公布的赖利属绦虫序列进行BLAST比对、同源性分析和遗传进化分析。同时试验通过化学染色、扫描电镜和透射电镜观察进行形态学鉴定,明确山西省鸡分离棘沟赖利绦虫的形态学和超微结构特征。结果表明,本试验扩增的18S rRNA序列长度为1643 bp,与我国青藏高原发现的棘沟赖利绦虫(MH119095.1)序列同源性最高,达到97.7%;遗传进化树显示两者位于单独的一个分支,与其他赖利属绦虫分支较远。试验扩增的ITS-2序列长度为564 bp,与青藏高原发现的棘沟赖利绦虫(MH122787.1)序列最为接近但存在较大变异性,同源性为83.6%;遗传进化树显示两者共同处于单独的一个分支。试验扩增的COX1序列长度为962 bp,遗传进化树显示山西省鸡分离绦虫位于单独的一个亚支,与其他赖利属绦虫种属相区分。绦虫形态学观察结果显示,山西省鸡赖利属绦虫为乳白色带状,长约5~10 cm。虫体头节较小,为球形,中央有一个可伸缩的顶突,四周有4个近似圆形的吸盘,顶突周围有两排小钩,每排小钩数约为22~25个。虫体颈节较短,不分节,位于头节之后。虫体成熟节片宽大于长,呈梯形,纵向有两条排泄管,雄茎囊位于排泄孔外侧。节片侧缘的上部有生殖孔,不同节片的生殖孔呈不规则交替分布。每个成熟节片中有30~40个睾丸,节片内可见发达的受精囊。虫体孕卵节片长大于宽,节片内所有系统几乎都已退化,只可见200~400个卵囊。卵囊为椭圆形,每个卵囊内可见一个已胚化的六钩蚴。扫描电镜下成节表面不平整;孕节表面光滑,有线性条纹。成熟节片透射电镜下可观察到丰富的线粒体、核糖体、蛋白质分泌颗粒和明显的纤毛结构。综上所述,试验通过PCR种属鉴定及形态学观察确定山西省鸡分离绦虫为棘沟赖利绦虫。试验明确了山西省鸡分离棘沟赖利绦虫的形态学特征,为山西省鸡分离棘沟赖利绦虫的鉴定和鸡绦虫病的防治研究提供了参考价值。
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