【摘 要】
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血管内皮损伤见于动脉粥样硬化、高血压、糖尿病血管病变等多种心脑血管疾病。血管内皮细胞在促进组织损伤修复起着重要的作用,间充质干细胞可以通过分泌多种细胞因子及向内皮细胞定向分化有助于血管内皮细胞的损伤修复及血管形成。我们前期研究证实敲低DNA甲基转移酶DNMT3A可以促进间充质干细胞向动脉血管内皮细胞分化,同时在间充质干细胞中敲低转录因子E2F1的表达可以抑制分化过程。本文主要对人脐带间充质干细胞(
【基金项目】
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国家重点研发计划(No.2017YFD0400304); 天津市自然科学基金(No.17JCZDJC33600); 天津市高等学校创新团队(No.TD13-5015);
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血管内皮损伤见于动脉粥样硬化、高血压、糖尿病血管病变等多种心脑血管疾病。血管内皮细胞在促进组织损伤修复起着重要的作用,间充质干细胞可以通过分泌多种细胞因子及向内皮细胞定向分化有助于血管内皮细胞的损伤修复及血管形成。我们前期研究证实敲低DNA甲基转移酶DNMT3A可以促进间充质干细胞向动脉血管内皮细胞分化,同时在间充质干细胞中敲低转录因子E2F1的表达可以抑制分化过程。本文主要对人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)向内皮细胞分化过程中DNMT3A与E2F1相互作用和机制进行了进一步研究。首先,在hUCMSCs向血管内皮细胞分化的过程中过表达E2F1同时敲低DNMT3A,利用Real-time PCR和Western blot技术发现敲低DNMT3A同时过表达E2F1能够增加动脉内皮标志基因Ephrin B2和HEY2的表达;利用体外基质胶成血管实验证实促进血管生成;利用裸鼠进行体内基质胶栓实验证实促进血管生成。其次,为进一步证实E2F1对动脉内皮细胞标志物基因的转录调控作用,在人动脉血管内皮细胞(HUAECs)中执行E2F1的功能获得和功能缺失实验,结果证实E2F1能够上调动脉内皮标志基因Ephrin B2、HEY2的表达,并促进动脉内皮细胞细胞的迁移能力与血管生成的能力;利用荧光素酶报告基因活性分析和染色质免疫共沉淀技术证实E2F1可以结合在Ephrin B2、HEY2的启动子上激活Ephrin B2、HEY2的转录。再次,通过在HUAECs中过表达E2F1同时敲低或过表达DNMT3A,发现过表达E2F1同时敲低DNMT3A能上调Ephrin B2、HEY2的表达,并促进动脉内皮细胞细胞的迁移能力与血管生成的能力;同时过表达E2F1和DNMT3A时,DNMT3A能够降低E2F1对Ephrin B2、HEY2表达及细胞迁移、体外血管生成的促进作用。最后,利用蛋白质免疫共沉淀技术证实E2F1与DNMT3A具有蛋白-蛋白相互作用,利用荧光素酶报告基因活性分析和染色质免疫共沉淀技术证实这种蛋白和蛋白的相互作用可能影响了E2F1与Ephrin B2、HEY2启动子的结合,进而影响了Ephrin B2、HEY2的转录和表达。综上所述,敲低DNMT3A同时过表达E2F1可以促进间充质干细胞向动脉血管内皮细胞分化和血管生成,DNMT3A可能通过影响E2F1与动脉内皮细胞标志基因启动子的结合影响其转录和表达。
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