环糊精接枝物的制备及其在生物转化中的应用

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环糊精凭借其特殊的空腔结构可增加疏水性甾体底物的溶解度,提高其生物利用率和转化效率,但是环糊精的高价格限制了它在生物催化领域中的应用。本论文以简单节杆菌(Arthrobactersimplex)催化醋酸可的松(CA)C1,2位脱氢反应为模型,研究β-环糊精及其衍生物接枝海藻酸钠和β-环糊精及其衍生物接枝海藻酸钠固定化简单节杆菌静息细胞对CA生物转化的影响,建立β-环糊精及其衍生物与简单节杆菌细胞循环利用工艺,从而降低生产成本。以环氧氯丙烷为交联剂制备了 β-环糊精及其衍生物-海藻酸钠的接枝物,研究了不同接枝条件对接枝率及CA生物脱氢反应的影响,从而确定了 β-环糊精及其衍生物与海藻酸钠的最优接枝条件:海藻酸钠与β-环糊精及其衍生物(5 mmol)摩尔比为1:1、环氧氯丙烷用量为0.1 mL、接枝反应温度70℃、接枝反应时间1.5 h、CaCl2浓度0.25 mol/L,此条件下采用酚酞分光光度法测得β-环糊精的接枝率达到10.3 μmol/g。采用X射线衍射法(XRD)和红外光谱法(FTIR)对β-环糊精及其衍生物-海藻酸钠的接枝物进行表征,研究了接枝物对CA的增溶作用。XRD和FTIR分析表明β-环糊精及其衍生物能与海藻酸钠接枝,并且接枝物能显著提高CA在水中的溶解度。考察了 β-环糊精及其衍生物-海藻酸钠在CA生物催化反应中的应用,发现β-环糊精及其衍生物-海藻酸钠可以提高CA的转化率,建立了 β-环糊精及其衍生物-海藻酸钠在CA生物脱氢体系中的循环利用工艺,β-环糊精及其衍生物-海藻酸钠循环利用8次,CA转化率仍能达到90%以上,实现了 β-环糊精及其衍生物的循环利用。确定了 β-环糊精及其衍生物接枝海藻酸钠固定化简单节杆菌细胞的制备工艺和循环利用工艺。固定化细胞浓度为15 g/L,β-环糊精-海藻酸钠-细胞循环利用8后,CA生物转化率仍能达到90%左右,可满足工业生产要求,实现环糊精及细胞的共循环,具有良好的工业应用价值。
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