黑曲霉spt7基因功能研究及应用

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaoyezi422
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
SAGA复合体是一种多功能蛋白复合物,负责细胞内10%以上的基因转录。Spt7作为SAGA复合体的核心蛋白,维持SAGA复合体的稳定。除酵母之外的真菌中并未有Spt7相关的研究报道。因此,本研究对黑曲霉来源的Spt7进行敲除及过表达,来观察表征以及转录水平对黑曲霉的影响,本研究对不同黑曲霉、丝衣霉等丝状真菌来源的Spt7的氨基酸序列进行多序列比对及蛋白结构的分析,发现Spt7在不同物种一致性较低,但均存在保守型的Bromo结构域。以黑曲霉1062为出发菌株,通过农杆菌转化法将过表达spt7的质粒p CS以及敲除spt7的质粒p C-S转入1062菌株中,获得黑曲霉OEspt7转化子1062-p CS以及黑曲霉△spt7转化子1062-p C-S。通过对OEspt7转化子、△spt7转化子及对照组在CM培养基生长形态进行观察分析,发现Spt7对菌体的菌丝的生长,产孢以及孢子成熟至关重要。过表达spt7转化子单位面积内的孢子数量是对照组的3倍,而敲除spt7后,菌落产孢之后且孢子成熟晚,孢子数量明显减少,几乎不可数。另外,我们将转化子与对照组进行了抗逆性观察,发现无论是spt7敲除还是过表达spt7均能提高黑曲霉的抗氧化性。我们推测过表达spt7提高了菌体内的抗氧化物酶的转录水平,所以菌体内SOD,GPX转录水平分别提高了3.97倍、4.11倍和0.76倍,使菌体对H2O2抗性增强。而敲除spt7后诱导菌体出现接交叉保护机制,导致菌体内Cpe B转录水平提高,是对照组的1.76倍,从而提高了菌体的抗氧化性。但是在菌体的耐热性方面,过表达spt7菌体的耐热性提高,经42℃水浴热激诱导后,检测spt7过表达转化子与对照组内的热激蛋白及热激转录因子,其中Hsp70,Hsp90的转录水平分别提高了1.42倍和2.14倍。热激转录因子Hsf提高了1.49倍。但是敲除菌株则在42℃下无法生长萌发。所以spt7对菌体耐热性有直接影响。根据在1062菌株的研究结果,我们对spt7提高菌体耐热性方面进行了应用。以柠檬酸高产菌株TNA09为出发菌株,过表达spt7,将转化子进行高温摇瓶发酵,发酵结果检测,过表达spt7转化子在高温下柠檬酸产量明显比对照组高。且显微镜下观察菌丝求形态,在高温下菌丝球形态完好,说明过表达spt7可以在高温下维持菌体的形态,进而减少高温对产酸的影响。
其他文献
胶质瘤是目前世界范围面临的严重健康问题,其死亡率居高不下。胶质瘤的常用治疗方式为化疗,而许多抗癌药物对胶质瘤的渗透性差,无法通过血脑屏障达到肿瘤组织,而大部分的化疗药物对正常的细胞会产生毒副作用。非离子表面活性剂囊泡(Nio)具有良好的生物相容性、生物可降解性和非免疫原性,因此本研究将通过制备非离子表面活性剂囊泡包载姜黄素,并通过转铁蛋白修饰囊泡,通过受体介导的转运作用而主动靶向入脑,提高囊泡给药
学位
<正>当前,青少年心理健康已成为中小学的一项重点工作。如今,学校的心育课程以西方心理学为理论依据,而东西方文化存在差异,由此影响了心育效果。习近平总书记曾多次强调中华优秀传统文化的“创造性转化”与“创新性发展”。在笔者看来,中华优秀传统文化蕴含着丰富的心育智慧,将中华优秀传统文化与心育相融合,能够构建更加符合我国青少年成长特点和心理需要的心育体系,为学生道德品质的完善和理想人格的养成起到培根铸魂的
期刊
核糖核酸(Ribonucleic Acid,RNA),简称核酸,在基因转录表达和蛋白质生物合成中起重要作用,同时,RNA及降解产物也广泛应用于在食品、医药和农业等领域。目前生产RNA的方法主要从酿酒酵母和假丝酵母中提取,但是假丝酵母非食品安全酵母,酿酒酵母天然不能利用乳糖。马克斯克鲁维酵母是一株非常规酵母,具有生长速率快、代谢底物广等特点,同时又是一种生物安全(GRAS)食品级微生物,因此可用于食
学位
本文推断在康熙二十八年洪昇国丧演剧一案遭国子监斥革的查嗣琏,应是于三十二年春再入都准备参加顺天乡试时,将籍贯自海宁改成钱塘,并更名慎行,希望能在仕途上重新出发。查慎行兄弟与子侄的科第甚盛,约三十年间即出了五进士、五举人。然雍正四年已七十七岁的慎行竟以“家长失教”遭弟嗣庭试题案株连,此一文字狱令其家总共十五人被逮入都,煊赫一时的查氏几乎家毁人亡,相关清代地方志的科第名单更将查嗣庭的资料全部删削,且未
期刊
L-苯丙氨酸在食品、医药等领域具有广泛的应用和巨大的市场价值。因此,有关提高L-苯丙氨酸工业化生产的研究手段也受到了广泛关注和深入研发。微生物发酵法作为目前工业化生产L-苯丙氨酸的主要手段,具有低成本、高效率等优点。传统的微生物发酵法主要依靠诱变筛选或者携带质粒来获得具有优良性状的生产菌株。但以上方法不仅效率低,而且很难获得具有稳定遗传特性的生产菌株。鉴于此,本研究采用了基于CRISPR/Cas9
学位
<正>关键能力既是学生核心素养内涵构成的三个重要要素之一,也是学科核心素养的三个维度目标之一,它与《普通高等学校招生全国统一考试大纲》(以下简称《考试大纲》)的能力要求一致。关于历史学科关键能力,朱汉国教授指出,它"就是能运用科学的史学理论和方法来认识和解释历史的能力"。一轮复习是高考总复习
期刊
幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染可导致严重的健康问题。截止2022年,幽门螺杆菌已经在全世界44亿人的胃部定植。目前针对Hp的治疗主要以抗生素为主,但随着抗生素的滥用,导致Hp耐药性增加,治疗失败可能会逐渐导致原发感染发展为更严重的并发症。脲酶是Hp在胃中定植和致病的关键因素,抑制脲酶的活性对降低Hp感染风险是至关重要的。本研究构建了特异性针对Hp脲酶亚单位(Ure
学位
γ-聚谷氨酸(γ-polyglutamic acid,γ-PGA)是一种广泛应用于食品、农业、医药等领域的生物聚合物,其具有可生物降解、可食用、水溶性强等特性。目前,γ-PGA主要通过微生物发酵法获得。本文以地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CGMCC NO.3336为出发菌株,在5L发酵罐上进行了分批补料发酵优化、发酵条件优化;在200L、50T发酵罐上进行了逐级放大实
学位
<正>一、提出化学学科关键能力的出发点1.关键能力2017年9月,中共中央办公厅、国务院办公厅印发了《关于深化教育体制机制改革的意见》(以下简称《意见》),明确提出"要注重培养支撑终身发展、适应时代要求的关键能力。在培养学生基础知识和基本技能的过程中,强化学生关键能力培养",并进一步指出要培养四种关键能力即认知能力、合作能力、创新能力和职业能
期刊
为优化能源结构,扎实做好碳中和、碳达峰各项工作,利用木质纤维素发酵生产生物燃料丁醇成为研究的热点话题。木质纤维素结构复杂,其主要成分通过化学键连接形成致密不易降解的生物保护屏障,因此在生物发酵前需要经过预处理破坏生物的保护屏障。预处理产生可发酵糖的同时,会产生糠醛等发酵抑制物,会影响菌体的生长和产物的积累。前期,实验室通过ARTP诱变和驯化,得到了一株高糠醛耐受菌株丙酮丁醇梭菌TUST 001,在
学位