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第一部分金黄色葡萄球菌耐消毒剂基因qacA/B分子流行病学研究目的:通过检测我院2007年1月到2009年6月临床分离的金黄色葡萄qacA/B基因,分析qacA/B在我院的流行情况,有利于指导临床合理使用消毒剂。方法:用PCR法检测mecA基因和qacA/B基因阳性率。以PFGE分型、spa分型、SCCmec分型及抗菌药物耐药谱表型分型对携带有qacA/B基因菌株进行同源性分析,结合临床病历资料,了解qacA/ B在我院的分子流行病学特征。结果:qacA/B基因的检出率为9.1%（12/176）,mecA基因的检出率为46.6%（82/176）,MRSA中qacA/B携带率14.6%（12/82）显著高于MSSA携带率（4/94）,且差别具有统计学意义（P<0.05）。Spa分型将16株SA分为8型,以t037和t042为主。PFGE分型将细菌分为A-G型,其中以A1、B、G分别属于同一克隆。12株携带有qacA/B金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型为SCCmecⅢ型。结论:菌株的流行主要在外科病房。携带有qacA/B金黄色葡萄球菌在神经外科ICU出现有一个流行克隆,其spa分型为t037。尽管其他病区qacA/B分布率低,但在MRSA流行率高的现状下,对其进行流行病学检测仍然具有重要意义。第二部分直接分子克隆法构建重组缺陷型腺病毒AdHu5-mfsp27基因及其扩增与纯化mfsp27基因属类细胞死亡诱导DNA片段化因子α效应蛋白家族,研究发现该基因可能为甘油三酯代谢途径中的一个重要基因,与非酒精性肝病的发病有密切关系。将该基因高效导入细胞或动物体内是详细研究该基因功能的前提。目的:构建重组腺病毒非酒精性脂肪肝发病相关基因AdHu5-040-fsp27（cds）高效高质量扩增和纯化重组腺病毒以满足体内外实验以及临床试验的需求。方法:直接分子克隆法构建重组腺病毒,目标基因首先克隆到穿梭质粒,并位于两个稀有限制性内切酶（I-ceuI and PI-sceI）后回收酶切片段后连接,然后线性化该重组腺病毒以释放腺病毒载体基因组的反向末端重复序列（ITRs）,利用磷酸钙转染重组质粒,HEK293细胞包装,感染扩增大量制备体内外实验所需重组腺病毒。氯化铯梯度离心纯化病毒并测定病毒的滴度。重组病毒MOI的测定。结果:成功构建pAdHu5-mfsp27（cds）。AdHu5-mfsp27经扩增后的滴度（O.D.）为1×1013VP/mL;MOI为1.44×1011,二者比值为69.44。重组腺病毒AdHu5-mfsp27可有效感染293包装细胞,提示该重组腺病毒具有潜在的临床应用价值。结论:本实验利用直接分子克隆方法构建重组腺病毒AdHu5-mfsp27（cds）并高质量扩增,解决了用同源重组的方法构建时难于挑选克隆,时间长成功率低的问题;利用高效液相柱,生物胶联合氯化铯梯度离心技术纯化病毒,简化操作不需透析病毒,最大程度保存病毒活性,纯度高,为下一步进行体内外试验研究该基因的功能以及真正实现重组腺病毒产业化提供可靠的实验室依据。