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目的：急性白血病是血液系统最常见的恶性肿瘤之一，在白血病细胞株和白血病患者中均发现有DNA的异常甲基化，并可能是引起白血病发生、发展的重要因素。DNA甲基化修饰由DNA甲基转移酶（DNA Methyltransferase, DNMTs）催化完成，使甲基连接到胞嘧啶的C5位置上，通常这一反应发生在5’-CG-3’序列，即所谓的CpG二核苷酸上，它是真核动物最常见的DNA修饰方式，它可以在不改变核苷酸序列的基础上改变基因的表达。因此，DNA甲基转移酶基因可以通过改变靶基因启动子区域内富含CpG序列（CpG岛）的甲基化状态，使其转录水平发生变化。近年来，人们研究发现DNA甲基转移酶参与基因的表达调控、胚胎发育、基因组印记和X-染色体失活等诸多重要的生物学过程，并与许多肿瘤疾病密切相关，在肿瘤细胞中，基因组DNA的总体甲基化水平比正常细胞低，但却伴有某些CpG岛甲基化程度增高，癌基因的广泛去甲基化和抑癌基因启动子区域的过甲基化均可影响肿瘤的发生、发展过程。在国外有研究证实，在白血病细胞中，有众多的基因处于异常甲基化状态，即包括癌基因的广泛去甲基化，也包括抑癌基因启动子区域的过甲基化。特别是后者，可能是导致白血病发生重要的原因之一。本研究制旨在探讨DNMTs基因在急性白血病患者中的表<WP=5>达及其与临床预后之间的关系。同时进一步了解甲基化抑制剂对白血病细胞恶性克隆生长抑制的影响及其作用机制，为临床治疗白血病提供帮助。方法：本研究对象为72例成人急性白血病（acute leukemia，AL）患者，其中急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）54例，急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）18例。正常健康人20例作为对照。采用半定量逆转录－聚合酶链反应（simi-quantify reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）方法对AL患者和20例正常对照的骨髓进行DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、P15、MDR1、PCNA mRNA水平的检测。采用甲基化特异性PCR（MSP-PCR）方法检测56例AL患者和14例正常对照P15基因启动子区域CpG岛甲基化率。通过细胞培养的方法对白血病细胞株K562、HL-60以及原代细胞进行传代培养，并用不同浓度的甲基化抑制剂5杂氮－2脱氧－胞苷（5-aza-2’-deoxycytidine，5-aza-CdR）对其进行处理，然后于镜下观察细胞增殖状况；用MTT法观察细胞活性及生长状况，并绘制生长曲线；用NBT还原实验观察HL-60细胞的分化情况；用Wright－Giemsa染色对各种细胞进行形态学观察；用DNA凝胶电泳观察细胞凋亡情况；用RT-PCR方法检测实验组与对照组DNMTs、P15、P53、Bcl－2的mRNA水平；用MSP-PCR方法检测原代细胞P15基因CpG岛在实验组和对照组的甲基化状况。结果：1. AL患者组所有三种DNMTs表达均明显高于对照组<WP=6>（P<0.01），改用增殖细胞核抗原（PCNA）作为内对照，差别仍具有统计学意义（P<0.01），对于DNMT3B来说，差别反而更明显，说明DNMTs在AL患者的高表达与细胞增殖程度无关。2. AL患者三种DNMTs基因表达之间呈明显正相关，表现为协同的高表达；而P15、MDR1与DNMTs表达则呈明显负相关，P15与MDR1之间表达无相关性。3. DNMTs基因同时阳性患者组，完全缓解率为74.5％；DNMTs基因部分阳性或阴性患者组，完全缓解率为23.8％，两者有明显差异（P<0.01），特别是在3例DNMTs同时阴性的白血病患者，首次诱导化疗无一例缓解。4. 在56例AL患者中，31例（55.4%）有P15基因启动子区域CpG岛完全甲基化，12例（21.4％）有P15基因部分甲基化，14例正常对照在同一实验条件下P15基因无一被甲基化，分组分析P15基因甲基化组与未甲基化组的DNMTs mRNA表达水平，发现甲基化组明显高于未甲基化组（P<0.01）。5. 甲基化抑制剂5-aza-CdR对HL-60、K562细胞株和白血病原代细胞的生长均有明显抑制作用，并存在有明显的剂量依赖性和时间依赖性的量效关系。6. 在0.5 umol/L 浓度下，5-aza-CdR对HL-60细胞的分化有明显的诱导作用，但在此浓度下，对原代细胞的诱导分化作用不明显，在高浓度5-aza-CdR作用下，各种白血病细胞均表现出明显的毒性作用。7. 在5-aza-CdR处理后，细胞形态发生类似变化，表现为染色质凝聚，核固缩破裂，有些出现凋亡小体，在<WP=7>5.0umol/L浓度下，部分细胞胞浆中空泡增多，并可见到细胞核与核膜溶解，核结构不清的退化细胞。8. DNA凝胶电泳显示，在5-aza-CdR处理后，细胞发生了不同程度的凋亡，以2.0 umol/L及5.0 umol/L最为明显，与对照组相比出现了明显的DNA梯形条带，但在低浓度5-aza-CdR组，DNA梯形条带形成不明显。9. RT-PCR结果显示，与对照组相比，各试验组细胞有明显的P15 mRNA和P53 mRNA表达上调以及Bcl-2 mRNA表达下调，并且表达强度与药物浓度有剂量依赖关系，但DNMTs mRNA在各组间的表达水平则无明显差别。 10.MSP-PCR结果显示，在原代细胞中，随着5-aza-CdR浓度的增加，其P15基因甲基化状态逐渐变低，在5.0 umol/L浓度下时，P15变为未甲基化状态。结论：1. DNMTs基因在成人AL有异常高表达，其可能通过促使抑癌基因启动子区域过甲基化，而使其转录失活，从而导致白血病恶性克隆的形?