论文部分内容阅读
第一部分冠状动脉粥样硬化大鼠模型的建立研究目的:通过对三种不同的大鼠冠状动脉粥样硬化模型造模方式的比较,探讨该模型建立过程中的影响因素,从而建立一种成熟的、可重复性好的大鼠冠状动脉粥样硬化模型,为进一步细颗粒物(PM2.5)对冠心病的毒性研究建立良好的动物模型基础。研究方法:将32只Wistar大鼠随机分为四组。一组为正常对照组喂以基础饲料,其余三组为造模组,分别喂以以下三种不同的高脂饲料:蛋黄组（10%蛋黄、10%猪油、5%白糖、0.5%胆酸钠、0.2%丙基硫氧嘧啶、74.3%基础饲料）、胆固醇组（4%胆固醇、10%猪油、5%白糖、0.5%胆酸钠、0.2%丙基硫氧嘧啶、80.3%基础饲料）、无丙基硫氧嘧啶胆固醇组（4%胆固醇、10%猪油、5%白糖、0.5%胆酸钠、80.5%基础饲料）,并在喂养初始,腹腔注射VD360万IU/kg,分三次,连续三天完成。正常对照组则以生理盐水替代。喂养期间监测体重改变,12周后,处死大鼠,收集血清,检测血脂各项（TC、TG、HDL、LDL）,计算动脉粥样硬化指数（AI）,并对冠状动脉的形态学改变进行观察。研究结果:1、TC、LDL水平:胆固醇组＞蛋黄组＞无丙基硫氧嘧啶胆固醇组＞正常组。2、AI:胆固醇组＞无丙基硫氧嘧啶胆固醇组和蛋黄组＞正常组。3、组织形态学观察发现,胆固醇组冠脉中有典型的动脉粥样硬化斑块形成,而蛋黄组、无丙基硫氧嘧啶胆固醇组均未见典型斑块形成。4、从造模第4周开始,蛋黄组及胆固醇组体重增长缓慢,甚至出现负增长,到造模结束时,两组体重显著低于正常组及无丙基硫氧嘧啶胆固醇组。研究结论:1、虽然大鼠等啮齿类动物本身并不易形成动脉粥样硬化（AS）,但经过适当的干预后,仍可用于AS模型的建造。2、由4%胆固醇、10%猪油、5%白糖、0.5%胆酸钠、0.2%丙基硫氧嘧啶、80.3%基础饲料配制而成的高脂饲料饲喂Wistar大鼠,并于喂养初始,腹腔注射VD360万IU/kg,12周后,可成功建立冠状动脉粥样硬化大鼠模型。3、在造模过程中,丙基硫氧嘧啶的使用,对于升高血胆固醇,促进AS形成具有重要作用。第二部分PM25致冠状动脉粥样硬化大鼠ACS的可能机制研究目的:摸索一种新的PM25染毒方式:分别提取PM25的水溶性成份（WSC）及酸溶性成份（ASC）,通过尾静脉注射的方式进行染毒。并探讨WSC、ASC对于AS大鼠的心脏毒性作用机制及阿托伐他汀的干预效果。研究方法:将大鼠随机分为三组:正常对照组、AS模型组、AS治疗组。AS模型组与AS治疗组按照第一部分中的胆固醇组造模方法建造AS大鼠模型,AS治疗组同时还给予阿托伐他汀10mg·kg-1·d-1灌胃治疗,AS模型组、正常对照组给予等量生理盐水灌胃。提取PM2.5的WSC及ASC。12周后,将WSC和ASC以尾静脉注射方式、PM2.5混悬液以非暴露式气管注入方式分别染毒各组大鼠（40mg/kg）,染毒24小时后处死。应用化学法、放射免疫法、酶联免疫吸附法、免疫组化法、凝胶滞留电泳等方法检测各项指标（血脂、MDA、SOD、IL-6、TNF-α、hs-CRP、ox-LDL、NF-κB）的变化情况。研究结果:1、WSC具有升高血清TC、AI、TNF-α水平,激活心肌NF-κB的作用。2、ASC具有升高血清TC、TG、LDL、MDA水平,降低血清SOD水平,激活心肌NF-κB的作用。3、AS模型与WSC、ASC染毒具有交互作用,主要表现在升高LDL、AI、IL-6水平,激活心肌NF-κB的作用上。4、阿托伐他汀治疗后,血清TC、LDL、AI、MDA、ox-LDL、BP水平均显著降低,血清SOD水平显著升高,心肌NF-κB的活化程度降低。研究结论:1、提取PM2.5的WSC及ASC成份,以尾静脉注射的方式染毒大鼠,对于PM2.5毒性机制的研究具有可行性。2、PM2.5对AS大鼠的毒性作用与升高血脂、氧化应激损伤和加剧炎症反应三个方面有关。3、PM2.5水溶性成份可能会通过加剧体内炎症反应,来发挥对AS大鼠的心脏毒性作用。4、PM2.5酸溶性成份对AS大鼠的心脏毒性作用则可能与氧化应激损伤和加剧炎症反应有关。5、在建立AS模型的基础上给予PM2.5染毒,则会加剧PM2.5的毒性作用,即两者有协同作用。6、通过阿托伐他汀的治疗,在一定程度上可以降低PM2.5对AS大鼠的心脏毒性作用。第三部分Atorvastatin单用及联合用药的干预作用研究目的:探讨阿托法他汀单用,以及分别与氯吡格雷、氯沙坦、卡维地洛等临床常用药联合用药后的抗AS作用。研究方法:按照第一部分的方法,建立大鼠的AS模型。12周后,分别给予阿托伐他汀(10mg·kg-1·d-1)、氯吡格雷(25mg·kg-1·d-1)、氯沙坦(20mg·kg-1·d-1)、卡维地洛(20mg·kg-1·d-1)、阿托伐他汀+氯吡格雷、阿托伐他汀+氯沙坦、阿托伐他汀+卡维地洛灌胃治疗。8周后处死,分别检测各项指标治疗前后的变化情况。研究结果:1、经阿托伐他汀治疗后,可显著降低AS大鼠血清TC、TG、LDL、ox-LDL、TNF-α、hs-CRP水平,及心肌NF-κB的活化程度。2、当阿托伐他汀与氯吡格雷合用时,除以上改变外,还有降低血清MDA、IL-6,升高SOD的作用,而且两者合用对升高SOD、降低hs-CRP具有协同作用。3、当阿托伐他汀与氯沙坦合用时,还出现了降低血清IL-6、升高SOD及降血压的作用,而且两者合用对降低心肌NF-κB的活化程度具有协同作用。4、当阿托伐他汀与卡维地洛合用时,还出现了降低血清MDA、升高SOD的作用,而且两者合用对降低AI、MDA水平具有协同作用。研究结论:1、阿托伐他汀除具有调脂作用外,还具有抗炎、抗氧化等抗动脉粥样硬化作用。2、阿托伐他汀与氯吡格雷合用,增强了其抗炎作用、抗氧化作用。3、阿托伐他汀与氯沙坦合用,在表现出降压作用的同时,还增强了其抗炎作用。4、阿托伐他汀与卡维地洛合用,增强了其抗氧化作用。