防己黄芪汤始载于东汉张仲景的《金匮要略》,全方由粉防己、黄芪、白术和甘草四味中药组成,是中医益气祛湿的经典方剂,现代临床主要用于治疗肾病综合征、慢性肾小球肾炎、心脏性水肿、风湿性关节炎等。阐明防己黄芪汤治疗肾病综合征的物质基础,对于指导其临床合理应用及控制中药质量具有重要的现实意义。本论文以防己黄芪汤为研究对象,综合应用血清药物化学、谱效相关和PK-PD模型等研究方法,探讨药物化学组成与生物效应间相互作用与联系,初步阐明防己黄芪汤治疗肾病综合征的物质基础。本论文分为五个部分:一、文献研究对目前中药药效物质基础主要研究方法进行综述,包括血清药物化学,谱效相关和PK-PD模型等。同时,本章综合查阅古代与现代研究文献,综述防己黄芪汤主要化学成分及药理作用的研究进展,为后续防己黄芪汤药效物质基础研究提供参考。二、防己黄芪汤相关化学成分研究应用UHPLC-TQ-MS技术,建立了一种针对防己黄芪汤中10种不同类别化学结构成分同时进行含量测定的方法,这10种成分在结构上涵盖了生物碱类、黄酮类、内酯类和三萜类,这使得所建立的含量测定方法能够全面地控制防己黄芪汤的质量。采用UHPLC-Q-TOF-MS技术对防己黄芪汤相关化学成分进行定性研究。采用AB Sciex TripleTOFTM 5600高分辨质谱,应用动态背景扣除技术（DBS-IDA）采集数据,结合PeakView SoftwareTM质谱分析软件,通过检测分析样品所得数据的组成元素和MS/MS二级碎片以及查阅相关文献,从防己黄芪汤中共检测出58种化合物,并鉴定出51个化合物的结构。通过建立体内成分代谢途径库,应用XIC manager工具对防己黄芪汤入血成分进行研究,最终筛选出105个成分,其中原型成分26个,代谢产物79个,Ⅰ相代谢产物52个,Ⅱ相代谢产物27个。三、防己黄芪汤治疗肾病综合征物质基础初步研究---单次给药通过单次给予阿霉素肾病大鼠防己黄芪汤后,考察肌酐、尿素氮和半胱氨酸蛋白酶抑制剂C等药效指标浓度随时间变化的趋势曲线,发现内源性成分半胱氨酸蛋白酶抑制剂C随给药时间的延长波动趋势明显,故选择该指标作为后期谱效相关的药效动力学指标。应用典型相关性分析方法对单次给予大鼠防己黄芪汤后血清图谱各个成分信号强度变化与半胱氨酸蛋白酶抑制剂C浓度变化进行相关性分析,结果显示有显著相关性的成分为N-甲基防己诺林碱、防己诺林碱、3个粉防己碱去甲基同分异构体、粉防己碱、箭毒碱、甘草利酮代谢产物、粉防己碱F代谢产物、甘草次酸和甘草查尔酮B代谢产物。在此基础上,探讨单次给予防己黄芪汤后大鼠体内防己诺林碱和粉防己碱的药代动力学特征,计算药代动力学参数,为了量化粉防己碱和防己诺林碱的药代动力学和药效动力学间的联系,根据药代动力学和药效动力学实验结果建立PK-PD结合模型。利用R软件的非线性拟合Package对该PK-PD模型的药效动力学过程进行拟合,根据计算结果得出KtF和KtT值相等,说明粉防己碱和防己诺林碱进入效应室的速率相等,根据拟合结果得出防己黄芪汤发挥药效的情况和预测值相吻合,进一步确定防己诺林碱和粉防己碱为防己黄芪汤中干预阿霉素肾病作用的主要物质基础。四、防己黄芪汤治疗肾病综合征物质基础深入研究---多次给药本章在已有研究结果的基础上,进一步考察防己黄芪汤对肾病综合征大鼠肾小球滤过率和脂质代谢的影响,探讨防己黄芪汤治疗肾病综合征的物质基础。采用尾静脉注射阿霉素复制大鼠肾病综合征模型,检测各组大鼠尿总蛋白、血清尿素氮、血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、血清总胆固醇、血清甘油三酯指标的含量。与正常组比较,模型组大鼠第17天24 h尿蛋白含量超过100 mg,血清尿素氮、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、总胆固醇、甘油三酯含量均显著性升高,结果显示肾病综合征模型复制成功;与模型组比较,随着给药时间的延长防己黄芪汤组大鼠血清尿素氮、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、总胆固醇、甘油三酯均显著性降低,说明多次给予防己黄芪汤对肾病综合征大鼠的肾小球滤过率、脂质代谢均有一定的调节作用。通过研究防己黄芪汤血清成分谱与其治疗肾病综合征药效指标变化的相关性来揭示防己黄芪汤发挥药效的潜在物质基础。应用典型相关性分析方法对防己黄芪汤血清图谱和药效指标进行相关性分析,结果显示防己黄芪汤药效物质基础为3个粉防己碱去甲基化代谢产物、N-甲基防己诺林碱、防己诺林碱、美迪紫檀素羟基化甲基化代谢产物、芒柄花素羟基化葡萄糖醛酸化代谢产物、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮去甲基化葡萄糖醛酸化代谢产物、毛蕊异黄酮葡萄糖苷羟基化脱水代谢产物、毛蕊异黄酮葡萄糖苷去甲基化代谢产物、Glyasperins C氢化代谢产物、甲基黄肉楠碱羟基化代谢产物、芒柄花素羟基化代谢产物、Odoration去碳酸基代谢产物、白术内酯Ⅱ乙酰化代谢产物、白术内酯Ⅲ羟基化代谢产物、白术内酯Ⅰ羟基化代谢产物、芒柄化素去甲基化氢化代谢产物、白术内酯Ⅱ羟基化去饱和代谢产物、白术内酯Ⅲ同分异构体、白术内酯Ⅲ、异甘草素、甘草素、异甘草素同分异构体、Gancaonins X、甘草次酸27个化学成分。考查多次灌胃给予大鼠防己黄芪汤后,粉防己碱和防己诺林碱在大鼠体内的药代动力学行为。为了量化粉防己碱和防己诺林碱的药代动力学与药效动力学之间的联系,本部分实验将药代动力学参数与大鼠药理效应指标进行模型拟合,建立PK-PD结合模型。对多次给药后大鼠体内不同时间点粉防己碱和防己诺林碱的AUC与血清总胆固醇、总甘油三酯和尿素氮药效指标进行线性回归分析,结果显示粉防己碱和防己诺林碱的AUC与药效指标呈良好的线性关系,即粉防己碱和防己诺林碱的药效与体内药物的累积效应具有较强的相关性,进一步确定粉防己碱和防己诺林为防己黄芪汤治疗肾病综合征的物质基础。五、防己黄芪汤功效组分对大鼠肾小球系膜细胞损伤的保护作用研究根据前期对防己黄芪汤治疗肾病综合征的物质基础研究结果,筛选出13个功效物质包括粉防己碱、防己诺林碱、甘草酸、甘草次酸、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、甘草苷、异甘草苷、黄芪皂苷Ⅰ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草素和异甘草素。根据前期对防己黄芪汤化学成分定性分析结果,得到13个功效物质的响应强度比例,结合前期10个成分的含量测定结果,将13个功效物质按原方的比例设计成一个化学组方。应用MTT法考察不同浓度防己黄芪汤功效组分对大鼠肾小球系膜细胞损伤的保护作用。通过不同浓度的双氧水对肾小球系膜细胞的刺激作用,建立肾小球系膜细胞损伤模型,考察不同浓度防己黄芪汤功效组分对损伤细胞的保护作用,结果显示,不同浓度（1×105,2×105,3×105,4×105,5×105 nmol/L）的双氧水对肾小球系膜细胞具有一定的损伤作用,双氧水浓度为2×105,3×105,4×105,5×105 nmol/L时,细胞吸光度的平均值均低于0.2。因此,本实验选择1×105 nmol/L作为双氧水体外诱导肾小球系膜细胞氧化应激损伤的最佳浓度。当化学组方浓度为25,50 nmol/L时,细胞存活率达到95%以上,说明防己黄芪汤功效组分对肾小球系膜细胞损伤存在一定的保护作用。