【摘 要】
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本研究运用双向电泳和质谱技术分析了米曲霉不同核型孢子中蛋白的表达差异,为探讨米曲霉生长发育过程孢子核型变化的遗传调控机制打下基础。主要研究内容及结果如下:(1)为了
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本研究运用双向电泳和质谱技术分析了米曲霉不同核型孢子中蛋白的表达差异,为探讨米曲霉生长发育过程孢子核型变化的遗传调控机制打下基础。主要研究内容及结果如下:(1)为了获得大量分生孢子,对米曲霉FS1125菌株进行固体产孢子培养条件优化。利用固体CD培养基培养,湿度及光照条件试验,确定了FS1125固体产孢子适宜的培养时间为9-10天;适宜的产孢条件为自然光照,湿度60%,温度30℃。(2)进行了米曲霉FS1125不同核型分生孢子的分离及破壁方法建立。在实验室前期工作的基础上采用膜过滤进行米曲霉单核分生孢子的分离与富集,用DAPI染色验证了膜过滤分离的可行性。发现了FS1125分生孢子在4℃保藏过程具有细胞核降解现象。比较了5种分生孢子破壁方法,将分生孢子破壁方法与适用于双向电泳的胞内蛋白提取相结合,建立了适用于双向电泳的米曲霉FS1125分生孢子的MP·Fast-prep均质器破壁法。(3)对米曲霉FS1125不同核型分生孢子进行了孢内全蛋白双向电泳分析。从上样量、等电聚焦程序两个方面优化了适用于米曲霉FS1125分生孢子孢内蛋白提取液的双向电泳条件。运用双向电泳技术分析米曲霉不同核型孢子中蛋白的表达差异,筛选出41个差异点。质谱鉴定后得到6种未知蛋白、45种已知蛋白质,其中包含多个热激蛋白和参与调解多种代谢途径的酶以及细胞内物质运输相关蛋白等。通过GO分类注释到了 21个GO terms上,KEGG富集分析发现注释到了多种不同的代谢途径,表明单核分生孢子与多核分生孢子孢内代谢途径或代谢活跃程度存在明显差异。通过String初步分析鉴定到的蛋白之间的互作关系,发现主要与Actin等物质运输蛋白相关,推断米曲霉分生孢子的核数目差异可能与这些物质运输相关蛋白的含量差异或者分配不均有关。
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