超声提取对防风多糖结构及生物活性影响的研究

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防风属于多年生的草本植物,在我国的东北部、内蒙古自治区、河北等地均有分布。防风中含有多种化学成分。其中多糖类物质是中药防风的主要活性成分之一,有抗癌、抗炎、抑菌、抗肿瘤等功效。目前,对防风的药理、复方制剂的研究和临床应用比较广泛,但对防风的化学成分微量鉴定以及防风有效成分分子水平的研究还不多见。本论文以中药防风为原料,使用不同频率和功率的超声提取防风多糖,对多糖的超声提取工艺和活性、分离纯化和理化性质、多糖的结构、分子修饰以及超声对结构的影响等方面进行了研究,结果如下:1.采用3种超声频率、4种超声功率提取防风多糖、对得到的12种多糖进行了抗氧化实验,结果表明,超声频率为135kHz、功率为290W时,提取的防风多糖得率最高,达到7.12%。超声频率在80kHz和135kHz,功率范围在150W-220W时提取的防风多糖抗氧化活性较高。超声提取防风多糖能够提高提取效率,选择适当的功率和频率能达到较好的抗氧化活性效果。2.12种不同超声参数提取的防风多糖经过DEAE-52纤维素和SephadexG-200凝胶柱层析分离纯化后得到19种纯品防风多糖,通过高效液相色谱和红外光谱分析得出,超声频率增大,得到的防风多糖分子量增大,超声功率的增大,得到的防风多糖分子量变小,超声的作用对多糖产生了一定的影响,但并没有改变多糖的特征。3.选取超声频率80kHz、功率220W提取的防风多糖(U-SPS),经纯化获得防风多糖主要成分U-SPS0和U-SPS1,通过紫外光谱、环境扫描电镜、原子力显微镜观察、热分析等对防风多糖的理化性质、形貌特征及热稳定性进行分析。结果表明, U-SPS0和U-SPS1糖醛酸含量分别为12.07%、0.95%; U-SPS0较U-SPS1更易溶于水;ESEM.AFM观察显示U-SPS0形貌工整,为链状多分枝结构,U-SPS1多糖形貌不规则,有少量分枝结构,U-SPS0在26℃-800℃范围内的稳定性高于U-SPS1。4.采用高效液相、气相色谱、红外光谱、部分酸水解、高碘酸氧化和Smith降解、核磁等物理化学手段对U-SPS0和U-SPS1的结构进行了分析。得出:U-SPSO和U-SPS1的相对分子量分别为:2.78×104Da、7.94×104Da;U-SPSO和U-SPS1均由甘露糖、葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖组成。U-SPS0的构型为β构型,糖链的结构重复单元可能为:U-SPS1的构型为β构型,糖链的结构重复单元可能为:5.对超声频率80kHz、功率220W提取的防风多糖进行硫酸化、羧甲基化、磷酸化、乙酰化修饰,并进行抗氧化实验,得出:羧甲基化修饰的防风多糖抗氧化活性显著提高,其次是硫酸酯化修饰的防风多糖。
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