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研究背景:动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的病理发展进程是一种慢性炎症反应,且是内皮损伤后的一系列进行性疾病。油酰乙醇胺(Oleoylethanolamide,OEA)是一种存在于组织和循环血液的内源性脂肪酸乙醇胺类化合物。已有大量文献报道,OEA具有降低脂质代谢,调节饮食、降低体重、神经保护及延长寿命等多种生物学作用。但是OEA抗动脉粥样硬化的作用及机制尚未可知。本论文分别通过体内体外实验,探究了 OEA对血管损伤后新生内膜的形成及由血小板衍生生长因子(Platelet derived growth factor,PDGF)诱导的大鼠原代主动脉平滑肌细胞(Rat Vascular Smooth Muscle Cells,rVSMCs)增殖及迁移作用的影响。我们研究发现OEA可以改善大鼠球囊损伤后的动脉新生内膜的形成、增加管腔的空间,减少新生内膜中增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)的表达,并且该作用可能是通过激活AMPK信号通路而产生抗细胞增殖的作用。另血管平滑肌细胞的异常增殖、迁移是血管再狭窄及动脉粥样硬化斑块形成的重要环节,我们研究发现OEA可以降低PDGF-BB及10%FBS诱导的rVSMCs细胞的增殖,并上调rVSMCs中p-AMPK/p-ACC的蛋白表达,抑制细胞周期相关蛋白cyclinDl的表达。同时OEA还能抑制由PDGF-BB诱导rVSMCs产生的迁移作用。研究目的:1.探究OEA对球囊损伤后大鼠动脉新生内膜形成的改善作用;2.探究在PDGF-BB诱导的大鼠VSMCs细胞中OEA抗增殖抗迁移的作用。研究方法:1.体内实验:采用球囊损伤手术(Ballooninjury),建立大鼠颈总动脉内皮损伤模型。选用成年雄性Sprague-Dawley大鼠(170-180g),随机分为假手术组(Sham)、模型组(Model)、非诺贝特组(Fenofibrate)(30mg/kg)、OEA15、30、60(15、30、60mg/kg)三个剂量组,手术前分别灌胃给予相应剂量的药物预保护三天,Sham组给予相应剂量生理盐水,Model组给予相应剂量溶剂。以球囊损伤法在大鼠左侧颈总动脉处造模,术后继续给予药物灌胃治疗。14天后,观察动物体重变化情况。通过制作血管冰冻切片,HE组织学染色观察各组大鼠手术段血管的新生内膜的增生情况(内膜中膜比、中膜厚度、内膜厚度、管腔面积)。通过免疫组化定性定量观察血管内壁的PCNA表达情况。Western Blot检测各组动物血管样本中 PCNA、cyclinD1、PPAR-α、AMPK、p-AMPK、ICAM、VCAM 等蛋白表达的情况。2.体外实验:提取大鼠原代主动脉平滑肌细胞(rVSMCs),通过PDGF-BB诱导观察rVSMCs细胞在OEA预保护下,细胞的增殖及迁移的变化,并通过MTS、Western Blot等方法,探究OEA对VSMCs细胞的细胞周期及增殖的影响,及对AMPK信号通路中相关蛋白表达的影响;通过划痕实验及Transwell实验探究PDGF-BB诱导下OEA对VSMCs细胞迁移作用的影响。实验结果:1.OEA能够降低大鼠体重,改善大鼠球囊损伤后14天动脉新生内膜的形成,降低内膜中膜比(I/M ratio),并且可以降低血管壁内PCNA的表达,并激活AMPK信号通路,下调细胞周期及相关蛋白及炎症因子的表达。2.OEA能够抑制由PDGF-BB诱导的VSMCs细胞的增殖及迁移,激活p-AMPK/p-ACC蛋白的表达,并降低VSMCs中cyclinDl等蛋白的表达。实验结论:1.在体动物实验的结果表明,从组织学角度,OEA能明显抑制机械损伤后大鼠血管内壁新生内膜的形成,这一作用的机制是通过激活AMPK促进动脉内壁的脂质代谢情况,改善球囊损伤后的新生内膜形成。2.离体细胞实验结果表明,在PDGF-BB诱导的VSMCs细胞中,OEA是通过抑制细胞周期蛋白以及激活AMPK信号通路发挥抗增殖的作用的,并且OEA同样能抑制VSMCs的迁移。