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目的：本课题旨在研究TGF-β1/Smad通路在慢性肝损伤过程中的动态变化及冬虫夏草提取物(Cordyceps mycelia extracts, CME)对慢性肝病中TGF-β1/Smad通路及肝星状细胞(Hepatic stellate cells, HSC)的影响。方法：1.168只SD雄性大鼠分为4组：对照组,模型组,CME组,溶媒组。模型组给予10mg/kg二乙基亚硝胺灌胃(5次/周)至14周,15-16周不做处理；对照组给予与模型组相同容量的生理盐水至14周,15-16周不做处理；CME组给予与模型组相同的处理并在4周末开始给予80mg/kg CME至16周；溶媒组给予与模型组相同的处理并在4周末开始给予与CME相同容量的溶媒至16周。2.分别在肝炎、肝纤维化、肝硬化及肝癌阶段处死大鼠,取肝组织进行HE及Mas son染色鉴定肝损伤模型是否成功,眼眶取血测定肝功能指标ALT及AST含量。3.改良Nycodenz法分离原代大鼠HSC,并提取肝组织及HSC总RNA及总蛋白,RT-PCR及实时荧光定量RT-PCR法分别检测肝组织与HSC中α-SMA, TGF-β1,Smad3,Smad7mRNA表达, Western Blot检测肝组织中Smad3, Smad7蛋白表达。结果：1.肝组织HE, Masson染色Scheuer法评分结果均示造模4,8,12,16周肝脏分别处于肝炎阶段,肝纤维化阶段,肝硬化阶段,早期肝癌阶段；细胞免疫组化法测定HSC标志物a-SMA呈阳性,荧光显微镜下观察HSC其可发出易淬灭的蓝绿色荧光,纯度达90%以上。2.模型组中肝组织及HSC中α-SMA, TGF-β1, Smad3, Smad7表达均呈动态变化。(1)肝组织及HSC中α-SMA mRNA在造模4,8,12,16周表达量均显著高于对照组,肝组织α-SMA mRNA表达量在12、16周表达最高,HSC中α-SMA mRNA表达量在12周最高。(2)肝组织与HSC中TGF-β1mRNA表达不一致：肝组织TGF-β1在造模4,8,12周表达量均显著高于对照组,且在第8周表达最高,但在造模16周TGF-β1表达量与对照组无显著差异,并显著低于12周模型组;HSC中TGF-β1表达量在造模4,8,12,16周均显著高于对照组,且在8周表达最高。(3)肝组织与HSC中Smad3表达趋势基本一致：肝组织Smad3mRNA及蛋白表达量在造模4,8,12周均显著高于对照组,在第8周最高；然而肝组织Smad3mRNA及蛋白在16周表达不一致：Smad3mRNA表达在16周显著高于对照组,而Smad3蛋白在16周表达量与对照组相比无显著差异；HSC中Smad3mRNA表达在造模4,8,16周均显著高于对照组,但在造模12周与对照组无显著差异。(4)肝组织与HSC中Smad7mRNA及蛋白表达在造模4,8,12周表达一致,与对照组相比无显著差异,但在造模16周肝组织Smad7mRNA及蛋白显著高于对照组,而HSC中Smad7mRNA表达显著低于对照组。3.CME可显著延缓大鼠慢性肝损伤的发展进程。(1)各项检测指标均显示溶媒组与模型组无显著差异。(2)CME组中ALT及AST水平显著低于模型组,HE染色及Masson染色评分证实CME在各时间点肝脏的炎症活动度,胶原沉积度和肝细胞损伤程度均比同期模型组低。(3)与模型组相比较,CME可在8周末降低肝组织中α-SMA, TGF-β1,Smad3及HSC中α-SMA,Smad3的表达,同时可上调肝组织及HSC中Smad7的表达。CME可在12周末降低肝组织中α-SMA,TGF-β1,Smad3及HSC中α-SMA的表达。CME可在16周末降低肝组织α-SMA的表达,并上调HSC中Smad7的表达。结论：1.HSC中TGF-β1,Smad3表达升高及Smad7低表达水平可能与HSC的激活相关；肝组织中TGF-β1、Smad3表达升高,Smad7低表达水平及HSC激活可能参与了肝炎-肝纤维化-肝硬化的发生发展；而肝组织中TGF-β1表达降低、Smad7表达升高及HSC激活可能共同参与了早期肝癌的发生发展。2.本实验证明CME可延缓二乙基亚硝胺导致的慢性肝损伤,对肝脏起到保护作用,此作用可能与其抑制TGF-β1/Smad通路激活,上调Smad7的表达并抑制HSC的活化有关。图17幅,表15个,参考文献62篇