【摘 要】
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目的:通过观察脂肪源性干细胞对缺血皮瓣成活率的影响情况,检测施加脂肪源性干细胞干预与否的皮瓣中相关细胞因子的差异表达,探究脂肪源性干细胞促进缺血皮瓣成活的可能机制。方法:1.分离、培养、观察脂肪源性干细胞,并对其细胞表面免疫表型和成骨能力进行检测;2.建立大鼠缺血皮瓣模型:以大鼠背部中线为轴,于对称轴两侧相对应位置各设计一个形状、大小完全一致的1.2cm×6cm的矩形皮瓣;3.对缺血皮瓣施加脂肪源
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目的:通过观察脂肪源性干细胞对缺血皮瓣成活率的影响情况,检测施加脂肪源性干细胞干预与否的皮瓣中相关细胞因子的差异表达,探究脂肪源性干细胞促进缺血皮瓣成活的可能机制。方法:1.分离、培养、观察脂肪源性干细胞,并对其细胞表面免疫表型和成骨能力进行检测;2.建立大鼠缺血皮瓣模型:以大鼠背部中线为轴,于对称轴两侧相对应位置各设计一个形状、大小完全一致的1.2cm×6cm的矩形皮瓣;3.对缺血皮瓣施加脂肪源性干细胞干预:每只大鼠背部右侧皮瓣为实验组,自术后即刻起每日行一次脂肪源性干细胞注射;每只大鼠背部左侧皮瓣为对照组,相同时间行同等剂量生理盐水注射。注射方法为于距皮瓣远端正中0.5cm、1.5cm、2.5cm、3.5cm处各标记一点,注射层次为皮下层。实验组于每点注射脂肪源性干细胞悬液0.1ml,共计0.4ml,脂肪源性干细胞总量约为8×10~6。在对照组的4个标记点每点注射生理盐水0.1ml;4.对皮瓣进行大体观察及成活率的计算;5.对皮瓣组织进行组织学观察（包括HE染色、Masson染色、VEGF免疫组化染色、TGF-β1免疫组化染色）;6.通过Real-time PCR实验与Western blot实验检测实验组皮瓣与对照组皮瓣内VEGF和TGF-β1生成量的差异;7.通过ELISA实验检测实验组与对照组皮瓣内炎性因子TNF-α、IL-6的表达差异;8.通过MTT实验检测与脂肪源性干细胞共培养与否的两组成纤维细胞的生存能力;9.通过Real-time PCR实验与Western blot实验检测与脂肪源性干细胞共培养与否的两组成纤维细胞内VEGF和TGF-β1生成量的差异。结果:1.分离培养后的脂肪源性干细胞传代后在光镜下呈长梭形并连接成片,流式细胞仪检测显示,细胞表面高表达CD73、CD90,不表达CD34、CD45。并且其在成骨诱导培养基的培养下表现出良好的向骨组织分化的能力;2.术后大体观察显示实验组皮瓣较对照组皮瓣坏死面积明显减少。对照组皮瓣总成活率为32.20%±1.1608,实验组皮瓣总成活率为63.42%±1.2137,组间P＜0.05;3.实验组与对照组HE染色、Masson染色结果显示,对照组较实验组皮瓣组织层次结构更加不规整,组织内小血管数减少。VEGF免疫组化染色、TGF-β1免疫组化染色结果显示,实验组皮瓣较对照组皮瓣显色颗粒明显增多;4.对皮瓣组织进行Real-time PCR实验与Western blot实验的结果显示,实验组皮瓣较对照组皮瓣内VEGF和TGF-β1的含量明显增加;5.对皮瓣组织进行ELISA实验的结果显示,实验组皮瓣较对照组皮瓣内炎性因子IL-6、TNF-α的含量有所减少;6.MTT实验结果显示,与脂肪源性干细胞共培养后的成纤维细胞成活能力较单独培养的成纤维细胞有所增加;7.对共培养后的成纤维细胞及单独成纤维细胞进行Real-time PCR实验与Western blot实验的结果显示,共培养后的成纤维细胞内VEGF和TGF-β1的含量较单独培养的成纤维细胞有所提高。结论:1.脂肪源性干细胞可以通过促进缺血皮瓣组织内VEGF和TGF-β1的表达而发挥促血管生成作用,进而增加皮瓣成活面积。2.脂肪源性干细胞可以通过抑制缺血皮瓣组织内IL-6、TNF-α的表达而发挥抑制炎症、减少组织损伤的作用,进而增加皮瓣成活的面积。3.脂肪源性干细胞可以通过增加成纤维细胞的生存能力,促进皮瓣的成活。
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