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土壤次生盐渍化是温室蔬菜生长中的主要障碍之一,严重制约设施蔬菜的可持续发展。黄瓜(Cucumis sativusL.)是中国设施栽培的主要蔬菜作物之一,属盐敏感植物,在种植过程中经常遇到盐害等逆境胁迫。已有研究表明,PLD信号转导途径与MAPK级联信号转导途径在响应逆境信号中存在关联性,故本文以NaCl模拟盐胁迫,研究黄瓜CsPLDα和CsNMAPK基因对盐胁迫的响应机制,为丰富黄瓜耐盐机理和创制抗盐黄瓜新种质提供理论依据。主要研究结果如下: 1.经100mM NaCl处理后,黄瓜幼苗叶片中CsPLDα和CsNMAPK表达量、蛋白表达量及酶活性分别在处理1h和3h达最大值;磷脂酸(PA)含量呈先升高后降低趋势,在处理3h后达较高值;一氧化氮(NO)含量在处理1h后比0h略有升高,但其他处理时间均低于0h;可溶性蛋白和丙二醛含量分别在处理3h和1h后达较高值。以上结果表明,CsPLDα和CsNMAPK基因均能响应盐胁迫,且CsPLDα响应早于CsNMAPK。 2.正常生长条件下,除拟南芥突变体mpk3发芽率稍低;野生型(WT)、突变体pldα1、互补株系MC和PC、过量表达CsPLDα株系(OE-1和OE-2)、过量表达CsNMAPK株系(OE-3和OE-10)和共表达CsPLDα和CsNMAPK株系(COE-17和COE-41)发芽率无显著差异。100mM和150mM NaCl处理下,WT发芽率显著降低;pldα1和mpk3发芽率显著低于WT;而互补株系MC和PC发芽率高于WT,但差异不显著;过量表达株系与PC、MC无显著差异;COE株系比OE稍高。表明CsPLDα和CsNMAPK基因共表达可提高拟南芥种子的抗盐性。 3.正常生长条件下(0h),过量表达CsPLDα黄瓜株系(P+)、过量表达CsNMAPK黄瓜株系(M+)和共表达CsPLDα和CsNMAPK株系(P+M+)中CsPLDα和CsNMAPK表达量均显著高于野生型黄瓜(WT),而抑制表达CsPLDα黄瓜株系(P-)和抑制表达CsNMAPK黄瓜株系(M-)中二者表达量均显著低于WT;M+和P+M+中膜磷脂种类及组分均高于WT,P+中PE、PS和PA含量均高于WT;P+M+中ABA、SA和GA含量均高于WT,JA含量低于WT。 4.盐胁迫下,WT、P+、M+、P-、M-和P+M+中CsPLDα表达量在1h后达最大,CsNMAPK表达量在3h后达最大,且P+、M+和P+M+中CsPLDα和CsNMAPK表达量分别显著高于P-和M-。随处理时间延长,P+中总DGDG、MGDG、PG、PC和PE含量呈升高趋势,WT、P+、P-、M+、M-和P+M+中PA含量均呈先降低后升高趋势,PA中所有组分34∶3、36∶6、36∶5和36∶3均有升高趋势;P+、P-、M+、M-和P+M+中ABA、GA和JA含量均有所升高,SA含量降低。处理1h和3h后,P+中PA含量均低于P-,M+中其含量均显著高于M-;处理1h后,P+M+中其含量比P+显著升高,比M+降低;处理3h后,P+M+中其含量均比P+和M+降低。处理1h后,P+M+中ABA含量比P+显著升高,与M+无显著差异,处理3h后,P+M+中其含量比P+显著升高,比M+显著降低。