松材线虫病是目前世界上重大的森林病害之一,其病原松材线虫是一种林业有害生物,尤其是对松树具有毁灭性的危害。它对世界上的松树构成了巨大的威胁,在我国主要危害火炬松、马尾松、赤松、黑松等。可以从调控松材线虫、寄主松树和传播媒介松墨天牛三者间关系达到防止松材线虫病传播危害的目的。松材线虫病的防治办法,目前以化学防治和物理防治为主,生物防治为辅,主要集中在清除病死松树和防治松材线虫病的传播媒介松墨天牛上,直接针对松材线虫的防治较少。Esteya vermicola,是第一个被报道的松材线虫内寄生真菌,在体外展示出了高侵染率,并且作为一种生物防控松材线虫的潜在应用,已经获得了专利。本实验室从韩国引进了这种具有生物防治潜力的松材线虫内寄生真菌,在前人研究结果的基础上,本文拟从生长温度差异、侵染温度差异、野外防治注射时间、浓度以及真菌与松墨天牛的共生五个方面对真菌进行试验,旨在为今后利用该真菌防治松材线虫病提供理论依据。本文通过分析菌落直径、萌发率、产孢量等,明确了在不同温度培养条件下E.vermicola生长的差异。试验结果表明,前三天中15℃与35℃的生长速率差别不大,从第9天开始,35℃培养的菌株停止生长。以菌落直径大小为指标,判定以25℃为培养温度的处理生长最快,以15℃培养的的处理生长次之,35℃的处理生长最慢。15℃和25℃两种培养条件下,E.vermicola均能萌发并产生具有粘附线虫功能的月型孢子。而在35℃培养条件下,虽然孢子最终能在第8天达到100%萌发,但随着时间的推移,并不能产生月型孢子,导致其丧失了感染松材线虫的能力。不同温度试验证明,在15-30℃温度下内寄生真菌E.vermicola对松材线虫均有侵染活力,但在不同温度下E.vermicola真菌对线虫的侵染活力上存在差异。低温时的侵染能力明显强于高温环境,孢子在低温环境下更容易粘附到线虫表面,侵染线虫。在15℃温度下侵染效果最好,25℃次之,35℃最差。被粘附的线虫1d后其体表开始有菌丝长出,2、3d后菌丝开始生长,分枝,蔓延,新长出的菌丝继续产孢进行二次生长。不同时间喷洒孢子悬浮液的试验证明了内寄生真菌E.vermicola对松材线虫有侵染活力,并且3种不同处理对线虫的侵染活力上存在差异。未被处理的对照组大部分松树遭到了严重的为害,表现出松针变黄、大部分枯萎和死亡。对照组在第一个月时松树开始出现症状,并且有2棵松树死亡,存活率为91.67%,在随后的2个月中,存活率从91.67%下降到52.5%,大部分松树遭到了严重的为害。同时,先接种线虫组与同时接种线虫和喷洒菌液处理组,在3个月后存活率分别为76.67%和84.17%。提前1周喷洒菌液的处理组在接种完线虫的第2个月开始出现枯萎症状,3个月后存活率最高,为90.83%,比其他处理表现出症状要更缓、更少。通过对天牛取食的树枝喷洒孢子悬浮液、天牛浸泡在孢子悬浮液中这2个方面的初步试验,为真菌和天牛的相互关系提供了一定的理论参考。虽然各处理间在初期的差别不大,但随着时间的延长,直接喷洒孢子在树枝上的处理组有着相对更高的存活率。6个月后,直接喷洒的处理组存活率最高,在67.5%-80%之间,天牛浸泡在孢子悬浮液的处理组次之,存活率在65%-70%之间。对照组的存活率只有40%-50%。通过使用不同浓度孢子悬浮液树干注射防治松材线虫病的试验证明了内寄生真菌E.vermicola能在一定程度上有效抑制松材线虫病,并且防治效果要优于利用阿维菌素进行防治。防治效果随着孢子悬浮液浓度的提升而提升。