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本研究选择了SPF18日鸡胚及出壳后1、4、7、14、28、56、84、120日龄鸡,分为两组,免疫组接种新城疫弱毒Lasota活疫苗,对照组鸡不做任何处理。两组鸡均在免疫后的第10天剖杀,采取法氏囊、脾脏,制作冰冻切片,以进行HE染色和免疫组化染色;无菌采取法氏囊、脾脏,分离淋巴细胞,进行淋巴细胞转化实验;采血、分离血清,进行间接ELISA实验。
利用HE染色方法观察不同日龄鸡免疫新城疫Lasota疫苗后法氏囊和脾脏的组织结构,结果表明:在法氏囊中,SPF对照组鸡淋巴滤泡的面积不断增大,呈现上升趋势,说明随着日龄的增长,鸡的免疫功能是逐渐增强的。免疫组鸡在不同日龄阶段淋巴滤泡面积较对照组呈现不同程度的增大,说明在Lasota疫苗抗原的刺激下,法氏囊进一步分化发育,执行免疫功能进而逐渐达到成熟;在脾脏中,SPF对照组鸡动脉周围淋巴鞘的面积随着日龄的增加呈现上升趋势,66日龄左右达到了成熟状态。免疫组鸡动脉周围淋巴鞘和脾小体的数量和面积均较对照组增多和增大,说明外源抗原的刺激能够促进免疫器官的组织发生和发育。
利用免疫组化法检测不同日龄鸡免疫新城疫Lasota疫苗后法氏囊和脾脏中IgM、IgG和IgA抗体生成细胞的动态变化,结果表明:在法氏囊中,对照组IgM+、IgG+、IgA+B淋巴细胞随着日龄的增加阳性细胞均呈增长趋势,并都趋于向髓质内迁移,直到94日龄达到最大值,说明此时法氏囊组织已经成熟,免疫功能也逐渐成熟。130日龄时淋巴细胞数量逐渐降低,说明法氏囊已经趋于退化。免疫组鸡皮质和髓质中的IgM+、IgG+、IgA+B淋巴细胞都较同日龄对照组鸡增多,其中胚胎18日龄、7、94日龄免疫组IgM+、IgG+、IgA+B淋巴细胞均较对照组差异显著增加(P<0.05);说明Lasota疫苗能够刺激法氏囊组织产生更多的B淋巴细胞,且胚胎免疫能够诱导大量抗体的产生;在脾脏中,SPF对照组鸡随着日龄的增加IgM+、IgG+和IgA+B淋巴细胞数量总体呈现递增趋势,66日龄时达到最大值,94、130日龄时下降且达到稳定状态。免疫组鸡在不同日龄免疫后脾脏中IgM+、IgG+和IgA+B淋巴细胞数量较对照组均不同程度增加。对照组鸡在不同日龄中IgM+一直高于IgG+、IgA+,但与免疫组比较,Lasota疫苗刺激脾脏产生IgG+增加的幅度高于IgM+、IgA+,说明外来抗原能够刺激机体产生更多的IgG+,并在体液免疫中占主导作用。
利用MTT法研究不同日龄鸡免疫新城疫Lasota疫苗后法氏囊和脾脏中B淋巴细胞增殖功能的变化,结果表明:不同日龄鸡免疫Lasota疫苗后法氏囊和脾脏B淋巴细胞增殖反应强度不同程度地高于对照组鸡。在7、11日龄免疫组与对照组比较差异不显著(P>0.05),可能是由于免疫器官的不成熟导致免疫细胞活性增殖能力弱的原因。同时我们还发现随着日龄的增加,B淋巴细胞增殖功能处于增强状态,说明法氏囊和脾脏中B淋巴细胞的体液免疫功能随着年龄的增长而增强。
利用间接ELISA法研究不同日龄鸡免疫新城疫Lasota疫苗后血清中NDV特异性IgM、IgG和IgA抗体的动态变化,结果表明:不同日龄鸡免疫后血清中抗新城疫免疫球蛋白IgM、IgG、IgA的含量均差异显著高于对照组(P<0.05),随着日龄的增加免疫组鸡IgM、IgG、IgA抗体含量增加幅度逐渐增大,其中IgG免疫组增加幅度较大,说明随着日龄的增加,Lasota疫苗刺激机体产生体液免疫应答能力逐渐增强。
综上所述,本实验首次对不同日龄鸡免疫新城疫Lasota疫苗后对B淋巴细胞的发育及其免疫功能发生进行了研究,表明不同日龄鸡免疫Lasota疫苗后能够促进免疫器官的组织发育、B淋巴细胞发育及其免疫功能的增强,表现了年龄相关性的变化过程,为进一步探索新城疫疫苗对B细胞引起的体液免疫机理提供有利数据,并为疫苗的适时免疫和疾病防治提供理论基础。