目的： 帕金森病(Parkinsons disease，PD)主要以中脑黑质内多巴胺能神经元进行性变性丧失为特征，是一种好发于中老年人常见的缓慢进展性神经系统变性疾病，发病率在神经变性疾病中处于第二位，而且发病率随着年龄增长而逐渐增高，65岁以上的老年人中，发病率占到1％～3％。当纹状体内多巴胺水平减少70％～80％，中脑黑质多巴胺能神经元变性超过50％时，与儿茶酚胺能神经递质之间的功能失调，导致锥体外系运动功能障碍，如出现静止性震颤、强直、运动过缓和姿势不稳等表现。 研究显示，几乎所有的中枢神经系统变性疾病中小胶质细胞均有可能参与到发生、发展的各个阶段，但在PD的发展中小胶质细胞的激活具有更加重要的意义。首先，氧自由基损伤在多巴胺能神经元损伤中具有决定意义，而小胶质细胞的激活是大量自由基产生的主要来源，其次，组织学研究表明中脑黑质区是小胶质细胞最富集的区域。在PD患者脑脊液中，伴随着中脑黑质致密部DA能神经元选择性丧失的是大量表达人类白细胞抗原(HLA)的小胶质细胞的激活，DA能神经元的丧失程度与小胶质细胞激活呈平行关系。小胶质细胞激活后所释放的前炎症细胞因子和过量的自由基介导了DA能神经元的损伤，因此只要能抑制小胶质细胞激活，就能最大限度的减少DA能神经元的丢失。 近年来，传统中医药疗法治疗PD的研究取得了一定的进展，尤其是针灸作为一种独特、安全、方便的治疗方法已经越来越多地运用于临床，取得了较为肯定的疗效。毫针、头针、电针等常用的针灸法用于帕金森氏病的治疗，针灸可以对肌电位产生影响、调整抗氧化酶系统，提高脑内DA水平及对免疫因子成分产生影响。但有关针灸治疗PD作用机制的深入研究甚少。我们在前期工作中，导师王华教授根据祖国医学理论，认为肝风内动是本病的主要病机，主病在肝，病位在脑，确定了通调脑络，熄风止颤，柔肝舒筋的治疗原则，根据“双固一通”针灸法的指导思想，选取关元、足三里、太冲、风府四穴，对PD模型大鼠施以电针治疗，发现针刺可使PD大鼠中脑黑质TH活性增强，大脑皮质一氧化氮合酶(NOS)表达降低，纹状体谷氨酸(Glu)含量下降，胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)表达增强，并观察了黑质神经元的超微病理改变。本课题拟在前期工作的基础上，建立早中期PD大鼠模型，采用免疫学和分子生物学实验方法，从细胞免疫、体液免疫、免疫调控等方面入手，在细胞和分子水平阐明针刺治疗对PD免疫功能的调节作用，从而为揭示针刺治疗PD的作用机制提供实验依据，并为临床治疗提供指导作用。 方法： 1.建立早中期偏侧PD大鼠模型：SD大鼠40只，随机分为4组：正常组，假手术组，模型组，“双固一通”组。在脑立体定位仪上，将6-OH DA 15μg(溶于3μl含0.2％维生素C的生理盐水中)，注入大鼠一侧纹状体尾壳核，术后第6周后以阿朴吗啡(apomorphine，APO)腹腔注射(0.5mg/kg)诱发旋转行为，40min内平均转速超过7r/min者为造模成功。 2.“双固一通”针刺治疗方法：取关元、足三里、太冲、风府，28号1寸毫针针刺，接G6805A型电针治疗仪，采用断续波，频率为2Hz，每天1次，每次30分钟，连续治疗2周后取材。 3.“双固一通”针法对PD模型大鼠黑质多巴胺能神经元含量的影响：以免疫组织化学方法检测各组黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞和纤维的形态及数量。 4.“双固一通”针法对PD模型大鼠黑质小胶质细胞含量的影响：采用蓖麻凝集素标记小胶质细胞。 5.“双固一通”针法对PD模型大鼠黑质TNF-α和IL-1β含量的影响：运用抗细胞因子单克隆抗体测定法测定TNF-α含量，运用免疫组织化学染色法检测IL-1β。 6.“双固一通”针法对PD模型大鼠黑质补体C1q和C9水平的影响，采用采用酶联免疫法(ELISA)检测。 7.“双固一通”针法对PD模型大鼠黑质神经元Bcl-2 mRNA表达的影响：rt-PCR方法检测Bcl-2 mRNA基因表达。 结果： 1.模型组损毁侧黑质致密部神经元总数、TH阳性神经元、神经纤维数量显著低于正常组和假手术组(P<0.01)，“双固一通”组与模型组比较各相应指标数值显著增加(P<0.01)； 2.正常组和假手术组几乎未见阳性小胶质细胞，而双固一通组的黑质小胶质细胞数量与模型组小胶质细胞数量相比降低(P<0.05)； 3.与模型组、正常组和假手术组相比较，“双固一通”组大鼠黑质TNF-α和IL-1 β含量明显降低(P<0.01)； 4.与模型组，正常组和假手术组相比较，“双固一通”组大鼠黑质补体C1q和C9含量明显降低(P<0.01.)； 5与对照组相比，Bcl-2 mRNA在模型组的黑质内表达活性有所下降，“双固一通”组Bcl-2 mRNA的表达增高，与模型组相比有显著差异(P<0.05)。 结论： 1.“双固一通”针法可以提高神经元总数、TH阳性神经元数量，阻止神经元进一步损伤； 2.“双固一通”针法可以抑制PD大鼠黑质异常增多的阳性小胶质细胞数量； 3.PD大鼠TNF-α和IL-1β含量过高，“双固一通”针法能降低二者含量，减少对神经元的毒性作用； 4.PD大鼠补体系统被激活，补体C1q和C9水平增高，“双固一通”针法可以下调补体C1q和C9水平，阻止其介导的免疫炎症反应对DA能神经元的损伤。 5.“双固一通”针法可以上调PD大鼠Bcl-2基因表达，延缓或阻断细胞凋亡过程。 6.“双固一通”针法可以调节PD模型大鼠的免疫功能，是治疗PD的一种较为可靠的方法。