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迷你月季(Rosa hybrida cv.mini)是现代月季中一个独特的类型,具有重要的观赏价值和经济价值。本文利用植物组织培养技术,在以迷你月季茎节为外植体获得无菌苗的基础上,研究来源于不同增殖培养基和不同高度的无根苗、培养基成分、培养温度等对试管开花的影响及花芽诱导过程中植物体内蛋白质的变化,并对迷你月季试管开花市场开发潜力进行了初步探索。通过本项目的研究,获得了一个稳定的较高开花率的迷你月季试管内开花体系并发现异常开花的现象,为月季开花的分子生物学机制研究提供了一个比较理想的实验系统,同时,由于试管开花的迷你月季独特的观赏价值而具有很好的应用前景。主要研究结果如下:
1.迷你月季组织培养再生体系的建立。以茎段为外植体,采用0.1%升汞连续浸泡3次,每次3 min的消毒效果较好,能获得74.44%的成功率。增殖培养基中6-BA浓度对增殖倍数和苗高具有显著影响,在0~3 mg/l的范围内,随着6-BA浓度的升高,增殖倍数增大,苗高则呈下降趁势。当6-BA为2.0 mg/l时,丛生芽增殖倍数可达4.30,平均苗高2.85 cm,无根苗生长整齐,颜色均为嫩绿色,是试管开花研究的理想实验材料。当6-BA为3.0 mg/l时,则表现为丛生芽多,增殖倍数达5.33,但芽矮细,有些苗生长不正常。
2.建立了迷你月季试管开花体系。以苗高2~3 cm、3~5 cm和>5 cm的三种类型的无根苗为外植体诱导试管开花。三者的平均开花时间和试管开花率无显著性差异。但2~3 cm的无根苗平均试管开花率最高,为41.33%,。
选取MS+6-BA2.0 mg/l+NAA0.2 mg/l和MS+6-BA0.2 mg/l+NAA0.2 mg/l两种不同继代培养基上的无根苗为实验材料,培养于诱导试管开花培养基MS+6-BA1.0 mg/l+NAA0.1 mg/l上,两种不同继代培养基来源的外植体材料的试管开花率没有显著差异,但两者的开花时间具有显著性差异。来源于MS+6-BA2.0 mg/l+NAA0.2 mg/l继代培养基上的无根苗的平均开花时间为26 d,比来源于MS+6-BA0.2 mg/l+NAA0.2 mg/l继代培养基上的无根苗提早8 d开花。
培养基中不同蔗糖浓度、不同无机盐含量、不同植物生长调节剂浓度、不同的昼夜温差处理均对试管开花具有显著的影响。30 g/l的蔗糖浓度最适合于试管开花;在MS培养基中附加0.2 mg/l6-BA和0.2 mg/l NAA比在1/2MS和1/4MS培养基上附加相同的植物生长调节剂能获得较高的试管开花率;1/2 N以及2P、4P也能提高试管开花率,与对照相比,均表现出显著性差异,而2K降低试管开花率。在MS+0.2 mg/l BA+0.2 mg/l NAA培养基上,在昼夜温差25±2℃的培养室中,试管开花率为43.33%,而在白天(8:00~20-00)培养温度28℃、晚上(20:00~8:00)培养温度18℃的光照培养中,试管开花率为65.67%,表现出显著性差异。
3.试管开花诱导培养过程中迷你月季可溶性蛋白质组分分析。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行蛋白组分分析,在继代培养30 d时和诱导开花培养35 d时,一条分子量约92 KD的蛋白没有表达,而在其它时期出现:在诱导开花培养20 d时,出现一条分子量为75.8 KD左右的特异性蛋白;在诱导开花培养35d时,出现一条35.3 KD左右的特异性蛋白,两条在其他培养时期出现大小约为17.5 KD和56.4 KD的条带没有在该时期出现。
4.试管开花的花期观察。比较试管培养与温室栽培的迷你月季的开花过程,结果发现在花蕾期、开花期、旺盛期、衰落期以及整个开花时间上两者无显著差异。