背景:衣原体（Chlamydia）是一类严格胞内寄生的原核细胞型微生物,可对人和动物均致病。衣原体感染人类结膜、呼吸道、生殖道可以引起结膜炎、呼吸道和生殖道感染等多种疾病。沙眼衣原体（C.trachomatis,Ct）作为众多国家与地区性传播感染（sexually transmitted infection,STI）的主要病原体之一,其感染人类不仅可引起沙眼与包涵体结膜炎,还能引起生殖道感染等疾病。鼠衣原体（C.muridarum,Cm）因与Ct种系关系较接近,常用于建立Ct感染女性生殖道的小鼠模型。Cm TC0668是一种染色体毒力蛋白,与Cm感染引起的小鼠输卵管炎性病变有关。将TC0668野生型单克隆菌株(Cm TC0668^wt)与TC0668突变型单克隆菌株(Cm TC0668^mut)平行接种小鼠建立生殖道感染模型,与Cm TC0668^wt菌株比较,Cm TC0668^mut菌株感染小鼠生殖道致病率明显降低,但Cm TC0668^mut菌株作为减毒活疫苗在预防衣原体感染性输卵管病变中的价值并不十分清楚。目的:通过Cm TC0668^mut免疫小鼠后用Cm NiggⅡ菌株进行攻毒,检测其作为衣原体减毒活疫苗的免疫原性和免疫保护作用,探讨Cm TC0668^mut在衣原体减毒活疫苗中的应用价值。方法:将Cm NiggⅡ菌株、Cm TC0668^mut菌株、Cm质粒缺失株（plasmid free,PF）和SPG同时免疫BALB/c雌鼠,在免疫后每隔3或7天取小鼠阴道分泌物通过间接免疫荧光法（Indirect immunofluorescence assay,IFA）检测下生殖道的衣原体载量;在免疫后第4周、8周取小鼠尾静脉血通过酶联免疫吸附测定（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清IgA、IgG及其亚型IgG1和IgG2a的抗体水平;在免疫后第4周、8周取小鼠阴道灌洗液通过ELISA检测分泌型IgA（sIgA）抗体水平;在免疫后第60天取小鼠脾细胞通过ELISA检测脾细胞上清分泌的细胞因子（IFN-γ、TNF-α、IL-4和IL-10）水平,并进一步通过流式细胞术检测脾细胞刺激后细胞因子（IFN-γ和IL-4）的表达水平;取小鼠生殖道组织肉眼观察进行输卵管积水程度评分,取生殖道组织进行病理切片,评估输卵管积水扩张程度和炎性细胞浸润水平。在免疫60天后,以Cm NiggⅡ菌株攻毒各组小鼠,攻毒后每隔3或7天取小鼠阴道分泌物通过IFA检测小鼠下生殖道的衣原体载量,并于攻毒后第60天处死小鼠,分离小鼠生殖道,肉眼观察输卵管水肿情况并评分,评估减毒株对小鼠感染Cm NiggⅡ菌株后产生的免疫保护作用。结果:（1）准备合适浓度（2.0?10⁵ IFUs）纯化的衣原体菌株,通过IFA定量衣原体的浓度并进行PCR测序,测序结果表明Cm TC0668^mut在特定碱基位点有突变,与突变菌株基因型完全符合。（2）衣原体免疫小鼠后,每隔3或7天取小鼠阴道分泌物检测下生殖道衣原体载菌情况,结果显示衣原体菌株免疫小鼠后生殖道中衣原体载量逐渐减少,并于免疫后28天全部清零。（3）血清特异性抗体IgA、IgG及其亚型IgG1和IgG2a水平检测结果显示,各组小鼠产生的IgA抗体水平较低,Cm NiggⅡ菌株、Cm TC0668^mut菌株和Cm PF免疫组小鼠产生的IgG抗体水平较高,且其IgG1/IgG2a的比值<1,表明Cm TC0668^mut菌株可诱导倾向于Th1型的免疫应答。（4）阴道灌洗液sIgA抗体水平检测结果显示,各组小鼠阴道灌洗液sIgA抗体水平均较低,免疫后8周sIgA抗体水平较4周无明显增长,表明各免疫组小鼠不能诱导产生有效的特异性黏膜免疫应答。（5）ELISA检测小鼠脾细胞上清产生细胞因子的表达水平结果显示,Cm TC0668^mut（G13.11.1,tc0668单基因突变型菌株）、Cm TC0668^mut（G28.51.1,tc0668和tc0237双基因突变型菌株）和Cm PF免疫的小鼠脾淋巴细胞均能产生较高水平的IFN-γ和TNF-α（Th1型CD4⁺T细胞产生）,且明显高于SPG阴性对照组。而各组小鼠脾淋巴细胞产生的IL-4和IL-10（Th2型T细胞产生）水平均较低,且各组之间无明显的统计学差异。以上结果表明,Cm TC0668^mut菌株诱导的特异性细胞免疫应答是倾向于Th1型的。（6）流式细胞术分析小鼠免疫后脾淋巴细胞的Th1/Th2亚群结果表明Cm TC0668^mut（G13.11.1菌株）组小鼠脾淋巴细胞内的CD4⁺T细胞均能分泌较高水平的IFN-γ。而各组小鼠脾淋巴细胞胞内分泌的IL-4水平均较低,且各组之间无明显的统计学差异。此结果进一步表明Cm TC0668^mut菌株诱导的特异性细胞免疫应答是倾向于Th1型的。（7）免疫60天后小鼠输卵管积水程度与炎性细胞浸润情况结果表明,Cm TC0668^mut（G28.51.1）菌株和Cm PF免疫组小鼠输卵管积水发病率相同且低于Cm NiggⅡ菌株免疫组,Cm TC0668^mut（G28.51.1）菌株免疫组小鼠输卵管发病率低于Cm TC0668^mut（G13.11.1）菌株。输卵管扩张和炎性细胞浸润情况表明Cm NiggⅡ致病菌株可引起输卵管扩张并可见明显的炎性细胞浸润,Cm TC0668^mut菌株和Cm PF感染小鼠生殖道则未见明显的输卵管扩张和炎性细胞浸润。（8）以Cm NiggⅡ菌株攻毒小鼠后,每隔3或7天取小鼠阴道分泌物监测衣原体载量,结果显示衣原体感染小鼠后阴道中衣原体载量逐渐减少,并于感染后35天全部清零。（9）攻毒后第60天肉眼观察输卵管积水程度,结果表明Cm NiggⅡ菌株攻毒Cm TC0668^mut菌株和Cm PF免疫后的小鼠引起的输卵管病变程度轻微,未见明显的输卵管水肿。而Cm NiggⅡ组和SPG组引起的输卵管病变程度降低。结论:鼠衣原体TC0668^mut菌株感染小鼠致病力低于Cm NiggⅡ菌株,G28.51.1菌株致病率与Cm PF相同且低于G13.11.1菌株;TC0668^mut株可诱导体液免疫应答;TC0668^mut菌株诱导的细胞免疫反应倾向于Th1型;TC0668^mut菌株免疫小鼠经Cm NiggⅡ致病株攻毒后不引起明显的输卵管病理反应,具有抗衣原体感染的免疫保护作用,因此Cm TC0668^mut菌株可能作为潜在的衣原体减毒活疫苗。