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目的:他莫昔芬(tamoxifen,TAM)是一种重要的内分泌治疗药物,主要用于治疗雌激素受体阳性(ER+)的乳腺癌或卵巢癌患者。然而无论雌激素受体状态变得如何,很多患者最终会出现TAM耐药。TAM耐药目前已成为导致乳腺癌复发的关键因素,由于其发生耐药的机制尚不清楚,因此成为困扰临床肿瘤治疗的一个重要问题。多西他赛(Docetaxel,Doc)又名多西紫杉醇,是一种人工合成的紫杉烷类抗肿瘤药物。Doc因其较高的抗肿瘤活性已被广泛用于晚期乳腺癌患者的临床治疗,但目前尚无研究报道Doc对TAM耐药乳腺癌患者的治疗效果。肽酰精氨酸脱亚氨酶(peptidylarginine deiminases,PADs)是一种钙离子依赖的蛋白修饰酶,参与多种病理生理过程,其中包括炎症、凋亡和衰老过程。CL-amidine(CLA)作为PAD家族的广泛抑制剂,能够抑制其蛋白酶的活性从而达到控制肿瘤细胞增殖、分化及侵袭的目的。近年来有研究发现,小分子靶向药物与临床化疗药物联用能够在既增强化疗药物杀伤癌细胞的效果同时,又降低了药物的起效浓度,这为未来临床化疗药物的使用提供了新的思路。本研究探讨了小分子靶向药物CLA增强TAM耐药的乳腺癌细胞对临床化疗药物Doc的敏感性的作用机制。方法:体外培养TAM耐药乳腺癌细胞(TamR)和293T细胞,细胞培养于DMEM高糖培养基中。CCK-8实验方法分别检测CLA与Doc对TamR细胞的IC50;对照组,Doc组(0.1μM),CLA组(25μM)以及Doc+CLA组分别作用不同时间后对细胞增殖作用的影响以及相同条件下加入mTOR通路激活剂MHY1485和不加入MHY1485对细胞增殖的影响;并采用Western blot,免疫荧光,流式细胞仪和RT-PCR等方法研究CLA增强TamR细胞对Doc药物敏感性的机制。将TamR细胞种植于6周龄裸鼠,随机分为对照组,Doc组(10mg/kg),CLA组(50mg/kg)以及Doc+CLA组,进而检测移植瘤大小,Western blot法检测肿瘤mTOR通路,增殖以及凋亡相关蛋白标记物表达。结果:CLA显著增强TamR细胞对Doc药物敏感性并显著抑制细胞增殖。CLA与Doc联合使用明显增加TamR细胞的凋亡率并使细胞阻滞在G2/M期。体外实验中CLA与Doc联合使用能够显著抑制AKT/mTOR信号通路,并且在使用mTOR通路激活剂MHY1485后,这种抑制效果减弱,同时伴有细胞增殖水平的升高;Western blot实验提示CLA与Doc联合共同激活p53相关靶基因并诱导细胞凋亡以及自噬发生;体内实验也验证了CLA与Doc联合使用能够显著抑制裸鼠移植瘤的生长。结论:本研究结果显示,CLA能够显著增强TAM耐药乳腺癌细胞对Doc药物的敏感性,CLA与Doc联合共同激活p53通路并诱导相关靶基因激活,从而导致TamR细胞发生细胞周期阻滞、凋亡和自噬。