补阳还五汤及其拆方对血脑屏障通透性的体外研究

来源 :河南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dai_dx
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目的:通过观察补阳还五汤及其拆方对体外血脑屏障模型通透性的影响,探究治疗缺血性中风的疗效机制,并明确不同构成要素作用价值,为临床组方用药提供实验室基础。方法:本文从大鼠脑中提取出大脑为血环内皮细胞和星形胶质细胞,采用星型胶质细胞和脑微血管内皮细胞建立体外BBB模型,建立共培养模型需要使用多孔底碟与12孔培养板配合使用,其底为一层多聚酯膜,其上遍布直径为3um的小孔,以0.01%鼠尾胶包被多聚酯多孔膜。星型胶质细胞第二代至80%融合时,消化、离心、计数、接种于多聚酯膜下面,细胞密度为5×10~4个/cm~2,200ul/孔,加入DMEM培养基和b FGFlng/ml。24h后接种脑微血管内皮细胞第二代至80%融合时,消化、离心、计数、接种于多聚酯膜上面,细胞密度为5×10~4个/cm~2,200ul/孔,培养基不变。48h后镜下观察细胞生长融合情况,并将体外BBB模型分为正常组、总方组、活血组和补气组,每组设3个复孔。每组加入对应含药血清。通过辣根过氧化物酶(horsenadish peroxidase,HRP)实验、液面试漏实验和和跨内皮细胞电阻抗(transendothelial electricalresistance,TEER)判断BBB细胞模型是否形成。通过跨内皮细胞电阻抗实验测量电阻,反应出足额脑屏障的通透率,并进行讨论。数据处理采用SPSS 19.0进行,实验数据用均数±标准差(x±s)表示,组间比较采用多因素方差分析方法,符合正态分布,且方差齐性者采用成组t检验,方差不齐者行校正t检验或配对t检验,以0.05为检验水准,P<0.05有统计学意义。结果:与正常组相比,补气组、活血组和总方组的TEER值在各个时间段均显著降低(P<0.05);在任一时间点,与补气组和活血组相比,总方组TEER值均显著降低(P<0.05)。结论:与正常组相比,补气组、活血组的和总方组的较正常组的HRP值在各个时间段均显著升高(P<0.05);在任意时间点,与补气组和活血组相比,总方组的HRP值均显著升高(P<0.05)。
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