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通过导入外源基因对水稻进行遗传改良被认为是水稻育种的有效途径（称为分子育种）。比如,通过转基因途径提高水稻抗虫、抗病和抗旱能力等方面已取得实质性成功。本研究利用基因枪法将外源的细胞分裂周期控制基因cyclAt和细胞分裂素合成的调控基因IPT转入水稻,旨在为了解水稻胚乳发育早期的调控机制,以及通过基因操纵手段从分子水平上对水稻籽粒发育进行改良做前期基础工作。 1 基因枪法转导cyclAt基因入水稻的研究 以cyclAt基因为目的基因,HPT和GUS为选择和报告基因,借助PDS-1000/He型基因枪轰击,将以上外源基因协同转导入来源于水稻成熟种子诱导产生的胚性愈伤组织,获得了转基因水稻植株。结果表明:通过X-Gluc染色分析,报告基因GUS在愈伤组织和再生植株叶片中的表达效率高。以转基因植株的基因组DNA为模板,用cyclAt基因的特异性引物进行PCR扩增,只检测到1000bp左右的片段,比其1604bp的完整序列小,因此推测cyclAt基因在转导入水稻后被剪接。此外,在协同转导过程中,cyclAt和GUS可能与受体基因组DNA随机整合,因此视GUS为报告基因有一定局限性;但两者同时被整合的频率远高于单一基因的整合。进行cyclAt基因的Southern杂交检测时,15株转基因水稻均表现阴性,其原因仍在探讨之中。 2 IPT基因在转基因水稻T1代中的基因重组分析和其对后代生物学性状影响的研究