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己烯雌酚（Diethylstilbestrol,DES）,是人工合成的非甾体雌激素,曾被广泛应用于畜牧业以达到促进动物生长,减少脂肪等目的。目前,DES已被确认为人类致癌物质。其在水体和土壤中不易降解,易在动物体内残留,会通过食物链在人体中富集,且对人体具有显著的生殖毒性。因此,各国已明令禁止在养殖中使用DES。但不法商贩为降低动物生产成本,非法使用现象仍然存在。这不仅严重威胁着人类健康,同时也给国民经济造成了巨大损失。为了有效控制因DES非法使用及其残留造成的食品安全问题,建立简便、灵敏、有效的DES检测方法具有重要的意义。目前,DES检测方法主要包括仪器分析方法和快速检测方法。常用的仪器分析法具有成本高,仪器设备昂贵,对操作人员要求高等问题,无法满足现场快速检测的要求。已建立的快速检测方法也存在免疫酶活性不稳定、抗体成本高等问题。因此,建立性能优异,操作简单,方便灵敏的新型快速检测方法显得尤为重要。论文采用具有高稳定性,高特异性,高亲和力,可以体外大量合成等优势的适配体,对DES的快速检测方法及其适配体筛选进行了以下研究:一是采用前人筛选出的适配体建立基于已知与酚羟基结合的适配体-胶体金（Au nanoparticles,Au NPs）比色的DES等具有酚羟基的待测物的检测方法,二是建立基于磁珠固定靶标-指数富集的配体系统进化（Systematic evolution of ligands byexponential enrichment,SELEX）筛选DES适配体的方法。前者可以有效实现对DES等具有酚羟基的待测物的检测,后者筛选得到了只与DES特异性结合的适配体,为基于适配体的DES检测方法的研究奠定了良好的基础。论文主要包括四个部分,内容如下:第一章主要概述了DES的理化性质和危害,对比了现有各种检测方法的优势与劣势。介绍了适配体及其特点,SELEX技术基本原理、筛选方法及应用研究进展。重点对食品中小分子的适配体筛选及其应用进行了综述。第二章建立了一种基于适配体-胶体金比色的DES等具有酚羟基的待测物的检测方法。一定浓度的氯化钠溶液会使胶体金发生团聚,使溶液呈现紫色。将胶体金作为比色探针,适配体作为识别元件,二者孵育后,适配体通过配位作用包裹于胶体金表面,使胶体金稳定存在于氯化钠溶液中,溶液呈现红色。当加入靶标DES时,适配体与DES特异性结合而发生构象改变,胶体金失去保护,在氯化钠溶液的作用下发生团聚现象,溶液由红色变为紫色。可以通过肉眼直观识别溶液颜色变化,实现对DES的快速检测。同时,对相应溶液进行紫外可见吸收光谱检测,DES浓度越高,胶体金聚集程度越高,溶液在650 nm与522 nm处吸光度比值(A650/A522)越高,从而建立?A650/A522与DES浓度之间的标准曲线。论文对胶体金与适配体的结合时间、氯化钠浓度、适配体浓度、DES与适配体的结合时间进行了优化。得到的最佳实验条件结果如下:胶体金与适配体的结合时间为40 min,氯化钠浓度为140 m M,适配体浓度为800 n M,DES与适配体的结合时间为30 min。在最优实验条件下,DES浓度处于100～600 n M时,?A650/A522与DES浓度呈现良好的线性关系,其线性回归方程为y=6.81×10-4x-0.02,R~2=0.9743。肉眼可辨别的DES浓度为400 n M,样品加标回收率为84%～105%。第三章建立了基于磁珠固定靶标SELEX方法筛选DES适配体的方法。由于第二章所建方法会对多种具有酚羟基的待测物产生响应,针对DES方法特异性不够好,故本章进一步筛选特异性针对DES的适配体。将DES羧基化,使其与氨基化磁珠偶联,实现靶标的固定。通过磁分离实现靶标-单链脱氧核糖核酸（Single-stranded DNA,ss DNA）复合物的分离。将氨基化磁珠作为负筛物,17β-雌二醇（17β-Estradiol,17β-E2）、双酚A（Bisphenol A,BPA）作为反筛物,结合SELEX技术和聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction,PCR）技术,进行孵育、清洗、热解离等11轮体外筛选,从1013～1015个不同序列的随机文库中筛选得到适配体。对筛选得到的适配体进行序列分析,二级结构分析,亲和力和特异性考察,得到DES的最优适配体。论文对PCR的循环轮数和退火温度进行了优化,得到的最佳实验条件如下:PCR循环轮数为25轮,PCR退火温度为57℃。在最佳实验条件下,共筛选得到21条适配体,总体同源性大于60%。经综合分析与测试,最终得到2条与DES结合力强、特异性高的适配体DES-01和DES-03。利用荧光亲和测定法测得解离常数分别为176.33 n M、141.25 n M。第四章对建立的DES适配体-胶体金比色检测方法和DES适配体的磁珠固定靶标SELEX筛选方法进行了总结。论文建立的DES检测方法具有操作简单,成本低等优点。筛选得到的适配体为DES快速检测方法的建立奠定了良好的基础。