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目的:依据国家标准要求探索与优化蒲公英酸奶制备工艺,探讨其对大鼠十二指肠主要优势菌群数量的影响。
方法:(1)按《中国药典》方法要求测定蒲公英原药材咖啡酸含量,建立高效液相色谱条件检测蒲公英水煎液咖啡酸含量;(2)建立感官评分方法,结合蒲公英水煎液、复合菌种、蔗糖添加量及发酵时长单因素考察结果,设计包含空白误差项的五因素四水平正交试验优化蒲公英酸奶制备工艺,对优化后的制备工艺进行再验证,结合国家标准完成其品质分析,并建立高效液相色谱条件检测蒲公英酸奶发酵前后咖啡酸含量的变化,同时结合长期储存蒲公英酸奶中乳酸菌及咖啡酸含量的变化完成其稳定性分析;(3)以蒲公英酸奶和普通酸奶对SD大鼠进行灌胃4周处理,通过构建荧光定量PCR检测乳菌酸、梭菌属、大肠杆菌、肠球菌、拟杆菌条件,并结合空白对照组分析蒲公英酸奶对大鼠十二指肠中优势菌群的影响。
结果:(1)实验用蒲公英中咖啡酸含量为0.0287%,建立的蒲公英水煎液浓度检测条件符合高效液相色谱系统性试验要求,水煎液中咖啡酸浓度为7.59939μg/ml;(2)单因素试验与正交试验考察蒲公英酸奶最佳制备工艺为:蒲公英水煎液添加量为5%、复合菌种添加量为1.Omg/ml、蔗糖添加量为70mg/ml、发酵时长为lOh;(3)蒲公英酸奶理化指标脂肪、蛋白质、非乳固体含量及微生物限量指标大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、酵母菌、霉菌含量均符合国家标准要求,对比发现蒲公英酸奶发酵前后咖啡酸浓度无明显变化,并发现蒲公英酸奶发酵后15d内酸度、乳酸菌总数及咖啡酸浓度无明显变化;(4)均构建出扩增效率良好的乳菌酸、梭菌属、大肠杆菌、肠球菌、拟杆菌荧光定量PCR工作曲线,4周灌胃处理后,普通酸奶组及蒲公英酸奶组较空白组大鼠比十二指肠中大肠杆菌、肠球菌数量显著下降,且蒲公英酸奶组较普通酸奶组下降更为显著,普通酸奶及蒲公英酸奶组较空白组大鼠比十二指肠中乳酸菌、梭菌属数量显著上升,且蒲公英酸奶组较普通酸奶组上升更为显著,三组对比拟杆菌数量无明显变化。
结论:(1)实验用蒲公英原药材咖啡酸含量高于《中国药典》要求,可用于后续实验研究,建立的液相色谱条件可有效检测蒲公英水煎液中咖啡酸的浓度;(2)蒲公英水煎液、蔗糖添加量及发酵时长对蒲公英酸奶制备影响较为显著,建立的液相色谱条件可有效检测蒲公英酸奶中咖啡酸的浓度,发酵后蒲公英酸奶有效保留了蒲公英成分咖啡酸:(3)蒲公英酸奶符合国家食品安全要求,在15天内食用本品最佳:(4)蒲公英酸奶对十二指肠中菌群的影响显著,既可促进益生菌的增殖,同时可降低大肠杆菌、肠球菌的数量,且效果明显优于普通酸奶。
方法:(1)按《中国药典》方法要求测定蒲公英原药材咖啡酸含量,建立高效液相色谱条件检测蒲公英水煎液咖啡酸含量;(2)建立感官评分方法,结合蒲公英水煎液、复合菌种、蔗糖添加量及发酵时长单因素考察结果,设计包含空白误差项的五因素四水平正交试验优化蒲公英酸奶制备工艺,对优化后的制备工艺进行再验证,结合国家标准完成其品质分析,并建立高效液相色谱条件检测蒲公英酸奶发酵前后咖啡酸含量的变化,同时结合长期储存蒲公英酸奶中乳酸菌及咖啡酸含量的变化完成其稳定性分析;(3)以蒲公英酸奶和普通酸奶对SD大鼠进行灌胃4周处理,通过构建荧光定量PCR检测乳菌酸、梭菌属、大肠杆菌、肠球菌、拟杆菌条件,并结合空白对照组分析蒲公英酸奶对大鼠十二指肠中优势菌群的影响。
结果:(1)实验用蒲公英中咖啡酸含量为0.0287%,建立的蒲公英水煎液浓度检测条件符合高效液相色谱系统性试验要求,水煎液中咖啡酸浓度为7.59939μg/ml;(2)单因素试验与正交试验考察蒲公英酸奶最佳制备工艺为:蒲公英水煎液添加量为5%、复合菌种添加量为1.Omg/ml、蔗糖添加量为70mg/ml、发酵时长为lOh;(3)蒲公英酸奶理化指标脂肪、蛋白质、非乳固体含量及微生物限量指标大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、酵母菌、霉菌含量均符合国家标准要求,对比发现蒲公英酸奶发酵前后咖啡酸浓度无明显变化,并发现蒲公英酸奶发酵后15d内酸度、乳酸菌总数及咖啡酸浓度无明显变化;(4)均构建出扩增效率良好的乳菌酸、梭菌属、大肠杆菌、肠球菌、拟杆菌荧光定量PCR工作曲线,4周灌胃处理后,普通酸奶组及蒲公英酸奶组较空白组大鼠比十二指肠中大肠杆菌、肠球菌数量显著下降,且蒲公英酸奶组较普通酸奶组下降更为显著,普通酸奶及蒲公英酸奶组较空白组大鼠比十二指肠中乳酸菌、梭菌属数量显著上升,且蒲公英酸奶组较普通酸奶组上升更为显著,三组对比拟杆菌数量无明显变化。
结论:(1)实验用蒲公英原药材咖啡酸含量高于《中国药典》要求,可用于后续实验研究,建立的液相色谱条件可有效检测蒲公英水煎液中咖啡酸的浓度;(2)蒲公英水煎液、蔗糖添加量及发酵时长对蒲公英酸奶制备影响较为显著,建立的液相色谱条件可有效检测蒲公英酸奶中咖啡酸的浓度,发酵后蒲公英酸奶有效保留了蒲公英成分咖啡酸:(3)蒲公英酸奶符合国家食品安全要求,在15天内食用本品最佳:(4)蒲公英酸奶对十二指肠中菌群的影响显著,既可促进益生菌的增殖,同时可降低大肠杆菌、肠球菌的数量,且效果明显优于普通酸奶。