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本论文通过4个试验研究了谷氨酰胺对早期断奶仔猪营养和抗免疫应激作用,分别从生长性能、血液生化指标、消化代谢、免疫指标、胃肠的凋亡和增殖以及肝脏、脾脏、心肌组织热休克蛋白的分布与表达探讨谷氨酰胺对断奶仔猪的营养及抗免疫应激的机理研究,旨在为为合理应用谷氨酰胺,缓解仔猪断奶应激,保证仔猪正常生长采取营养调控措施提供理论依据。
试验一选用96头28±1d断奶、体重为6.16±0.13kg的长白×约克夏仔猪,按单因素完全随机化设计随机分为6个处理,日粮中谷氨酰胺的添加浓度分别为0%、0.3%、0.6%、0.9%、1.2%和1.5%。试验期21d。在断奶后7天、14天、21天测定生产性能、粪中指标、血液生化指标和免疫指标。试验结果表明:(1)随着谷氨酰胺添加量的增加,早期断奶仔猪日增重、日采食量提高(P<0.05),料肉比下降(P>0.05);(2)谷氨酰胺能提高早期断奶仔猪血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白含量,降低血清蛋白质系数、尿素氮,对肌酐含量影响不显著(P>0.05)。谷氨酰胺能提高早期断奶仔猪血清中ALT、ALP、5-NT和GST活性和HCO3-浓度,降低血清中AST活性。(3)谷氨酰胺提高仔猪肠道有益菌群的增殖,提高了仔猪的消化代谢能力,表现在提高粪中有机酸和pH值,同时,降低了氨的含量,这对降低畜舍污染起到一定的作用。(4)随着谷氨酰胺添加量的增加,早期断奶仔猪红细胞和血小板数目增加,白细胞和嗜酸性白细胞数目下降(P<0.05)。谷氨酰胺能提高早期断奶仔猪淋巴细胞转化率和特异OVA抗体效价,提高仔猪的免疫性能;(5)综合各项指标,谷氨酰胺的最佳添加剂量为1.2%。
试验二选用40头28±1d断奶、体重为6.84±0.25kg的长白×约克夏仔猪,按单因素完全随机化设计随机分为2组,一组为对照组,喂基础日粮。一组为试验组,基础日粮中谷氨酰胺的添加浓度1.2%。在断奶后7天,取各处理仔猪胃、大肠和小肠组织,常规切片,采用S-P免疫组织化学染色方法检测细胞凋亡调控基因Bcl-2和Bax蛋白表达及增殖细胞核抗原PCNA蛋白表达的情况。试验结果表明:谷氨酰胺提高了粘膜和黏液屏障、上调胃肠粘膜细胞Bcl-2蛋白(P<0.05)表达和下调Bax蛋白(P<0.05)表达,增加PCNA蛋白(P<0.05)表达。其保护机制可能是通过谷氨酰胺提高胃肠细胞的抗氧化性能而实现的。
试验三采用随机化设计,选用28土2d的大白×长白断奶仔猪72头,平均体重7.78±0.42kg,按体重相近原则随机分为三组,一组为对照组,第二组为免疫应激组,在断奶后7天注射100μg/kgBWLPS;第三组为谷氨酰胺+免疫应激组:断奶后饲喂含谷氨酰胺浓度为1.2%的日粮,7天后注射100μg/kgBWLPS。注射LPS后2.5h,测定血液生化指标。试验的第8天,测定淋巴细胞转化率。结果显示:(1)LPS应激显著提高了血浆皮质醇和血清肌酸激酶的水平(P<0.05),而谷氨酰胺降低了血浆皮质醇和血清肌酸激酶的水平(P>0.05)。(2)免疫应激促进了糖、蛋白和脂肪的分解(P<0.05)。(3)LPS刺激激活了仔猪血清自由基,而谷氨酰胺显著的提高了血清中CAT、GSH、SOD、T-AOC、显著的降低了MDA含量(P<0.05);(4)LPS刺激降低了红细胞、血红蛋白和血小板的水平,而谷氨酰胺缓解了血细胞的显著变化。谷氨酰胺对免疫应激下白细胞数目和分类比例影响不大,但却提高了白细胞的吞噬能力和淋巴细胞转化率。
试验四试验设计同试验三。注射LPS后2.5h,各重复随机选择1头仔猪屠宰,用免疫酶技术,测定肝、脾、心肌和骨骼肌中HSP70的阳性表达面积和灰度值。试验结果表明:谷氨酰胺可以增强LPS刺激后肝脏(P<0.05)、脾脏(P<0.05)和心肌(P<0.05)中HSP70的表达,这可能是谷氨酰胺提高仔猪抗免疫应激作用机制。