蛹虫草有效成分的提取及保健食品的开发

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蛹虫草(Cordyceps militaris)又称北冬虫夏草,野生的蛹虫草是冬虫夏草的一种,蛹虫草天然资源的世界性分布数量很少。蛹虫草主要的活性成分主要是腺苷类、虫草多糖、甘露醇、SOD酶和麦角甾醇等。其种类和含量在一定程度上决定其镇定催眠、抗氧化、防治衰老、增强免疫、抗肿瘤和保护心肺组织等功效。目前的报道主要集中在虫草素和虫草多糖,而针对蛋白质研究和相关保健品的开发的内容较少。本文主要研究内容及结果如下:本文分别采取水热浸提法,醇热回流法,超声波水提法,超声波醇提法四种方法提取蛹虫草中的虫草素,并通过单因素和响应曲面法分别对四种方法进行优化。得到水热浸提法最佳条件组合为:提取温度58.64℃,提取次数为2.38次,提取时间为5.3小时,料液比为1:14.98;醇热回流法最优条件为:提取温度82.21℃,提取时间3.28小时,醇浓度为82.31%;超声波水提法提取虫草素的最优条件为:超声波功率731.60W,提取时间22.14分,料液比为1:12.85;醇热回流法的最优条件为:超声波功率为719.4W,提取时间19.21分钟,醇浓度为68.96%。通过四种方法提取蛹虫草虫草素的优化结果比较,得到虫草素提取结果分别为1.55mg/g,0.416mg/g,1.263mg/g,0.538mg/g,即得率分别为0.155%,0.0416%,0.1263%,0.0538%。发现水热浸提法所得到的虫草素得率最高,方法最优。因此采用水热浸提法提取蛹虫草中的虫草素。利用选取的提取方法对蛹虫草中的虫草素进行提取,并通过制备工艺制备蛹虫草蜂蜜浸膏,配方为30g质量的蛹虫草蜂蜜浸膏中含有2g蛹虫草,其余为蜂蜜。考察了蛹虫草蜂蜜浸膏的增强免疫力的保健作用,以2.5g/kg.bw、5.0g/kg.bw、15.0g/kg.bw的蛹虫草蜂蜜膏经口灌胃给予小鼠30天。15.0g/kg.bw剂量能增加小鼠迟发型变态反应能力、淋巴细胞转化能力、抗体生成细胞数、血清半数溶血值,与对照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01);5.0g/kg.bw、15.0g/kg.bw剂量能增加小鼠NK细胞活性,与对照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.05);对小鼠体重增长、脾脏/体重比值、胸腺/体重比值及小鼠单核一巨噬细胞碳廓清能力、巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力无明显影响(P>0.05)。以上结果显示该样品具有增强免疫力的功能。通过加速实验对蛹虫草蜂蜜浸膏的稳定性进行考察,结果显示蛹虫草蜂蜜膏中的有效成分虫草素并没有明显变化,而各项指标也均无明显变化,卫生学指标也符合《保健(功能)食品通用标准》GB16740-1997的规定。采用碱提酸沉法提取蛹虫草蛋白,通过单因素和响应曲面实验对提取方法进行了优化。分析得到,碱法提取蛹虫草蛋白质的最佳工艺条件为,提取时间128min,料液比1:16.2,NaOH溶液的浓度0.14mo1/L。通过比较水解度、酶解液的颜色、酶解液的浑浊度等三个方面的酶解效果,选取了木瓜蛋白酶和复合型蛋白酶,并根据不同酶组合比例的酶解液的水解度选择木瓜蛋白酶与复合蛋白酶的配比为1:3,即0.20%+0.6%的酶配比对提取出的蛹虫草蛋白质进行水解。通过单因素实验和响应曲面法对提取条件进行优化,最终确定酶解的最佳条件为酶解时间为4.5h,pH为7.19,酶解温度为52.54℃。最终测定蛹虫草蛋白质酶解后得到的肽总量为51.62mg/g。研究制备了蛹虫草含片,研究了蛹虫草粉的添加量与片剂感官指标的关系,白砂糖对蛹虫草草特殊气味的影响以及其改善片剂的口味作用,β-环糊精对片剂色泽及味道的影响,硬脂酸镁对片剂组织状态的影响及淀粉和麦芽糊精的添加比例与片剂的口感的影响,从而确定了蛹虫草含片的配方(以物料质量5g为例)为,蛹虫草粉0.5g,白砂糖0.2g,β-环糊精0.4g,硬脂酸镁0.05g,食盐0.01g,淀粉与麦芽糊精的质量均为1.92g。
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