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目的：通过腺相关病毒.(AAV)载体介导人β-神经生长因子(β-NGF)基因和人血小板源性生长因子基因B(PDGF-B)联合转染体外培养的猫角膜内皮细胞,探讨其对该细胞生物学效应的影响。方法：体外培养的猫角膜内皮细胞,通过细胞形态学观察、神经特异烯醇化酶(NSE)单克隆抗体免疫荧光染色鉴定细胞的种类及纯度。构建AAV载体,利用AAV载体介导绿色荧光蛋白(GFP)基因转染猫角膜内皮细胞,根据其阳性表达率测定转染效率。AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B分别和联合转染猫角膜内皮细胞后,Real-Time PCR及Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测转染24h、48h、72h后β-NGF和PDGF-B的表达变化。AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B分别和联合转染猫角膜内皮细胞72小时后,通过MTT检测细胞增殖能力的改变,流式细胞仪测定处于G1期的细胞比例,检测外源基因对细胞周期的影响。划痕实验观察AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B对细胞迁移能力的影响。结果：猫角膜内皮细胞体外培养可形成完整的细胞单层,经形态学观察、NSE免疫荧光染色证明为纯净的猫角膜内皮细胞。AAV介导的绿色荧光蛋白基因转染猫角膜内皮细胞72h后,荧光显微镜下观察可见细胞内清晰的绿色荧光,测得转染效率可达67.8%。AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B分别和联合转染猫内皮细胞后,Real-Time PCR和Western blot结果显示,转染后各时间点猫角膜内皮细胞中β-NGF和PDGF-B的mRNA和蛋白表达随时间延长不断增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。联合转染组中β-NGF和PDGF-B在不同时间点的表达与单独转染组差别无统计学意义(P>0.05)。MTT结果显示,AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B分别和联合转染猫角膜内皮细胞后增殖能力较对照组增强,联合转染组更为明显,差别均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B转染组细胞周期中G1期细胞比例增加,联合转染组增加更为明显。划痕实验表明,AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B转染后可以增强细胞迁徙能力,联合转染组效果更为明显,差异具有统计学意义(P<0.05)结论：AAV可有效介导人β-NGF基因和PDGF-B基因转染体外培养的猫角膜内皮细胞,并在猫角膜内皮细胞中持续稳定表达。AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B分别和联合转染猫角膜内皮细胞后可以增强细胞的增殖和迁移能力,联合转染的效果更加明显。