番茄组蛋白乙酰转移酶基因SlHAG14的克隆及功能研究

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组蛋白乙酰化是通过一组称为组蛋白乙酰化酶(HATs)和组蛋白去乙化酶(HDACs)作用于组蛋白赖氨酸残基的ε的氨基的酶进行的可逆过程。基于与其他真核HATs和结构域组成的同源性,目前将植物HAT分为四组:(i)具有乙酰基转运载体(HG1)结构域(PF00583)(AT1)的HAG包括GCN5-,ELP3-,HAT1样乙酰转移酶;(ii)具有MYST(MOZ-YBF2/SAS3-SAS2-TIP60)结构域的HAM;(iii)与p300/CREB结合蛋白相似的HAC;(iv)与TATA结合蛋白相关因子(TAFII250)家族有关的HAF。预期拟南芥基因组分别编码属于GCN5,HAT1和ELP3家族的三种HAG,At HAG1,At HAG2和At HAG3。ELP3是催化亚单位,含有C-末端组蛋白乙酰转移酶(HAT)结构域和类似于硫磺(Fe-S)基S-腺苷甲硫氨酸(SAM)结构域的N-末端富含半胱氨酸的基序。单独的ELP3具有固有的HAT活性,能够乙酰化所有四个组蛋白,而六亚基全长伸长剂主要乙酰化组蛋白H3的赖氨酸-14和组蛋白H4的赖氨酸-8。At HAG3/At ELP3是保守的Elongator HAT复合物的成员,其在转录延伸期间与RNA Pol II相互作用,并且在器官生长期间在细胞增殖中起作用。此外,At HAG3可以调节植物对ABA的反应,抗氧化应激和花青素生物合成。拟南芥延伸酶还调节生长素信号基因SHY2/IAA3,生长素流入载体LAX2,乙烯信号传导,茉莉酸信号和非生物胁迫。此外,At HAG3的RNAi株系对农杆菌介导的转化具有抗性。番茄基因组编码26个与HAG组相似的蛋白质。鉴于广泛的表达值,我们将番茄HAG分为低,中,高表达。在番茄中,At HAG1/At GCN5,At HAG3和At MCC1最接近的同源物分别是S1HAG1,S1HAG14和S1HAG12。At HAG3参与转录延伸,细胞增殖,叶轴发育,幼苗和根生长,At MCC1参与开花时间和减数分裂。At HAG3(ELP3)在拟南芥参与ABA反应.本文利用生物信息学定性分析我们得到了一个番茄转录因子SlHAG14(Solyc03g110910)基因。SlHAG14蛋白属于番茄组蛋白乙酰化酶(HATs)HAGs家族的B类,与ELP3协同参与组蛋白乙酰转移酶延伸子复合体介导的转录延伸过程。番茄SlHAG14与拟南芥乙酰转移酶基因At HAG3具有较高的同源性。通过qRT-PCR预测其组织表达模式特异性以及该基因(T1代)的幼苗对多种激素相关性、非生物胁迫相关性的实验,结合相关表型下的生理生化指标做更明确的定性分析。研究中,我们可知SlHAG14基因在野生型番茄不同组织和发育阶段的表达量特异在果实。利用RNAi技术,我们构建了SlHAG14基因的沉默载体,进而通过农杆菌侵染转化得到了番茄转基因植株以及阳性筛选和鉴定。通过RT-qPCR来鉴定Sl HAG14基因在转基因番茄阳性植株中的表达,我们选取沉默效率最好的三个株系RNAi-1,RNAi-5和RNAi-10(效率约为80-85%左右)用于后续实验。本研究结果表明,沉默Sl HAG14基因提高番茄果实总类胡萝卜素含量。组织表达模式分析表明SlHAG14基因可能参与果实成熟过程;并且沉默SlHAG14基因表达受乙烯的诱导。目前本研究通过实验结果转基因(T1代)幼苗与ABA敏感性在浓度高抑制Sl HAG14基因表达,表明SlHAG14基因可能参与ABA响应。番茄转基因(T1代)幼苗与激素(GA3,Me JA)以及盐胁迫的敏感性相对不明显。研究中可知一部分番茄Sl HAG14基因生物学功能,所需要进一步深入研究使能够全面结论番茄SlHAG14基因生物学功能。
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