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妊娠期是猪重要的繁殖性状之一。在生产过程中缩短母猪的妊娠期可以缩短其繁殖周期,提高母猪的繁殖效率,降低生产成本。妊娠期是数量性状,由多基因的控制的,且单个基因的效应值较小,易受环境因素的影响,用常规的育种方法对其进行遗传改良进展缓慢。有研究报道影响猪妊娠期的QTL位于猪的第1、9和15号染色体上,根据猪-人基因组比较图谱和基因的生理生化功能选取了两个候选基因:肾素(Renin)和白介素-10(IL-10)。应用生物信息学和比较基因组的方法对这两个基因进行了克隆,经不同品种间序列的比对发现这两个基因的突变位点,并选择三个突变位点与妊娠期和产仔数进行相关性分析:1.根据与人的Renin基因有较高同源性的猪EST以及人和小鼠等物种该基因cDNA相似性较高的区域设计了5对引物,以梅山猪cDNA作为模板扩增、克隆并测序,拼接后获得1333 bp的整合cDNA序列,包含全部CDS和部分5’和3’非翻译区。利用获得的cDNA序列设计18对引物对其DNA序列进行扩增,克隆、测序和拼接后得到了13332bp的DNA序列。2.利用Clustal X、ORF Finder、Spidey、MEGA4.0、PSORTⅡ等软件对猪Renin基因结构、编码的蛋白质分子量、等电点、系统进化树等特征进行了预测和分析。我们发现该基因共有9个外显子和8个内含子且内含子的剪切方式符合“GT-AG”法则,进化树分析得出该基因与反刍动物的相似性最高,与啮齿类的次之,与灵长类的最低。3.根据猪IL-10基因的cDNA序列设计7对引物,克隆得到了该基因4062 bp的DNA序列,经过对该基因的结构进行分析,该基因包含有4个内含子,内含子的剪切方式符合“GT-AG”法则。4.根据已获得的Renin基因的cDNA序列设计引物,用RT-PCR的方法检测其在不同组织中的表达情况,发现在肾、卵巢和输卵管中有表达,在肾中的表达最高。5.根据获得的这两个基因的序列,清平猪、大白猪、长白猪和杜洛克猪的DNA作为模板进行扩增、克隆并测序。经序列比对,发现了在Renin的第6内含子228bp处发现一个C/T转换,第7内含子的114bp处发现一个A/G转换和IL-10基因第3内含子的835bp处发现一个A/G转换,据此建立适宜的PCR-RFLP SNP分型方法。6.Renin的第6内含子内的突变可以被HhaⅠ酶切,建立该基因的PCR-HhaⅠ-RFLP检测方法,对该位点在清平猪、新清平猪、长白猪、大白猪,杜洛克猪和中国瘦肉猪新品系DⅣ1系、DⅣ2系7个中外猪群体中进行基因型分型,分析了它们的基因型频率和基因频率,并与妊娠期和产仔数进行相关性分析,结果表明该位点TT基因型在国外猪种中占有优势,地方品种和培育品种与外种猪的基因型频率之间均存在显著地差异,且都达到了极显著的水平。该位点在新清平猪中对于妊娠期的显性效应达到了显著地水平。在DⅣ1系中CC基因型的妊娠期要显著高于TT和CT基因型的妊娠期。该位点在不同的群体中对于产仔数的加性效应和显性效应均不显著。7.Renin基因第7内含子内的突变可以被bstxⅠ酶切,建立该基因的PCR-bstxⅠ-RFLP检测方法,在清平猪、新清平猪、长白猪、大白猪杜洛克猪和中国瘦肉猪新品系DⅣ1系、DⅣ2系7个中外猪群体中进行基因型分型,分析了它们的基因型频率和基因频率,并与妊娠期和产仔数进行相关性分析,结果表明该位点A等位基因在各个猪群中占有优势,在杜洛克猪中除外。大部分猪群之间基因型频率差异显著。在新清平猪中该位点对于妊娠期的显性效应差异显著,为0.93d。该位点在杜洛克猪中对于产仔数的加性效应达到极显著地水平,GG基因型的产仔数要显著地高于AG和AA基因型的产仔数。8.IL-10的第3内含子内的突变可以被Eco81Ⅰ酶切,建立该基因的PCR-Eco81Ⅰ-RFLP检测方法,在清平猪、新清平猪、长白猪、大白猪杜洛克猪和中国瘦肉猪新品系DⅣ1系、DⅣ2系7个中外猪群体中进行基因型分型,分析了它们的基因型频率和基因频率,并与妊娠期进行相关性分析,结果表明该位点GG基因型在清平猪、新清平猪和杜洛克猪中占有优势,而在长白猪、大白猪、DⅣ1系和DⅣ2系中AA基因型占有优势。大部分猪群之间基因型频率差异显著。该位点在杜洛克猪中对于妊娠期的显性效应显著,致使AG基因型的妊娠期要显著长于AA基因型的妊娠期。该位点在大白猪中对于产仔数的加性效应显著,GG基因型的产仔数要显著少于AG和AA基因型的产仔数。