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茶树是我国重要的经济作物，香气是衡量茶叶品质好坏的关键因素。茶树叶片中的单萜烯醇和芳香族醇等挥发性组分主要是以糖苷形式存在，且以樱草糖苷和葡萄糖苷为主。糖苷类物质是茶树在生长发育过程中形成的次级代谢产物，与这类糖苷的合成与水解相关的酶类主要有β-樱草糖苷酶、β-葡萄糖苷酶Ⅰ、β-葡萄糖苷酶Ⅱ等。糖苷类香气前体被内源糖苷酶水解后释放出的挥发性苷元，不仅是茶叶香气的物质基础，也参与茶树对病虫害的防御反应。克隆及表达茶叶香气形成途径中的关键内源酶类，对于深入了解茶叶香气形成机理，丰富和完善茶叶加工和茶园管理理论与技术，促进抗病与高香茶树良种的培育都具有重要的理论意义和应用价值。本文利用课题组前期从茶树叶片中纯化出两种与茶叶葡萄糖苷类香气前体水解相关的β-葡萄糖苷酶的cDNA全长序列，以及NCBI网站GeneBank中已登录的β-樱草糖苷酶序列，分别设计了原核表达引物，采用RT-PCR技术，从茶树叶片中分别对各基因的编码区进行全长扩增。将扩增片段克隆到pMD18-T上并进行序列测定，测序结果分别与原序列比较，显示克隆得到的序列一致性达到99%以上。通过生物信息学分析，茶树β-樱草糖苷酶（Pri）基因cDNA全长序列为1729bp，开放阅读框1524bp，编码507个氨基酸，分子量为57.04kD；β-葡萄糖苷酶Ⅰ（GluⅠ）基因cDNA全长序列为2337bp，开放阅读框1896bp，编码632个氨基酸，分子量为69.15kD；β-葡萄糖苷酶Ⅱ（GluⅡ）基因cDNA全长序列为2215bp，开放阅读框1887bp，编码629个氨基酸，分子量为68.87kD。系统进化分析表明，这三个内源糖苷酶基因都与已知的β-glucosidase基因亲缘关系较近，其中GluⅠ和GluⅡ与葡萄中的β-glucosidase基因相似性最高，而Pri与茶树中的β-glucosidase基因相似性最高，并且与GluⅠ和GluⅡ关系较远。茶树内源糖苷酶相关基因在原核中表达，通过选用表达载体pET-32a(+)和宿主菌Rosetta(DE3)pLysS对茶树中β-樱草糖苷酶（Pri）、β-葡萄糖苷酶Ⅰ（GluⅠ）、β-葡萄糖苷酶Ⅱ（GluⅡ）进行了表达，研究了不同诱导时间、不同诱导温度对这三种茶树内源糖苷酶相关基因表达的影响并测定了三者表达产物的活性。表达结果表明，诱导5h、37℃时目的基因均能大量表达蛋白，但Pri、GluⅠ和GluⅡ三个基因均以包涵体形式存在，蛋白质分子量分别约为56kD、70kD和68kD，与预测的蛋白分子量基本一致。