第一部分 肿瘤细胞来源的免疫球蛋白G结合血小板FcγRⅡa并活化血小板的作用研究
　　目的：肿瘤相关性血栓是肿瘤患者死亡的第二大风险因素，肿瘤患者的血小板常出现活性异常现象。然而血小板活化的机制尚未完全阐明。据报道，肿瘤细胞来源的 IgG 可调节肿瘤的发展。然而关于肿瘤细胞来源的 IgG 的功能的研究非常有限。本实验主要探讨肿瘤细胞来源的IgG在血小板活化中的作用及机制。
　　方法：采用流式细胞术检测血小板CD62P的表达，并通过血小板聚集和ATP释放分析血小板功能。通过酶联免疫吸附试验检测肿瘤细胞培养上清液中 IgG 的含量。蛋白质免疫印迹分析FcγRⅡa，Syk，PLCγ2的表达及它们的磷酸化水平。通过免疫共沉淀分析肿瘤细胞来源的IgG和血小板FcγRⅡa之间的相互作用。
　　结果：与健康志愿者相比，肿瘤患者血小板CD62P表达水平更高。肿瘤细胞培养上清可以诱导血小板CD62P和PAC-1的表达，并促进激动剂诱导的血小板聚集和ATP释放，而阻断FcγRⅡa或敲低 IgG 会减弱肿瘤细胞培养上清对血小板的活化。免疫共沉淀结果显示肿瘤细胞来源的IgG直接与血小板FcγRⅡa相互作用。此外，肝癌患者血小板FcγRⅡa的表达高于正常血小板。
　　结论：肿瘤细胞来源的IgG直接与FcγRⅡa相互作用而活化血小板，靶向这种相互作用可能是预防和治疗肿瘤相关性血栓形成的方法。
　　第二部分 血小板浸润肝癌组织的机制研究
　　目的：血小板已被证明具有主动迁移的能力。在人肝癌组织中，我们发现血小板浸润在血管外。然而，血小板浸润肿瘤组织的机制及作用仍然未知。在本研究中，我们探讨了血小板浸润肝癌组织的机制和作用。
　　方法：免疫荧光分析肝癌组织中血小板的浸润；Transwell检测肝癌细胞培养上清对血小板迁移的诱导作用；流式细胞术分析迁移的血小板数量和血小板胞内钙信号变化；通过siRNA转染技术及肝癌原位模型分析CX3CL1在血小板迁移中的作用；通过线粒体膜电位检测及细胞周期检测来分析迁移的血小板对肝癌细胞的影响；Western blot分析缺氧下CX3CL1的表达及CX3CL1对Syk、PI3K磷酸化的影响；免疫组织化学法分析肝癌组织中CX3CL1、Bax、Bcl-2及Ki67的表达；皮下移植瘤检测迁移的血小板对肝癌生长的影响。
　　结果：在人及小鼠的肝癌组织中均存在血小板的血管外浸润，癌旁组织中均未检测到血小板的浸润；肝癌细胞培养上清可以直接诱导血小板迁移；敲减肝癌细胞CX3CL1 的表达显著减弱血小板的迁移和血管外浸润；人 CX3CL1 重组蛋白可以浓度依赖性地诱导血小板迁移；缺氧通过上调 CX3CL1 的表达而促进血小板的迁移；分别阻断血小板 CX3CR1、Syk 及 PI3K 均抑制血小板的迁移；阻断CX3CR1减弱CX3CL1对血小板Syk和PI3K的磷酸化；血小板的浸润和肝癌原位瘤的生长抑制存在相关性；迁移的血小板可以诱导肝癌细胞线粒体膜电位下降；迁移的血小板抑制肝癌的生长。
　　结论：肝癌细胞来源的 CX3CL1 通过作用于血小板 CX3CR1 并活化其下游Syk/PI3K 通路而诱导血小板浸润肝癌组织，浸润的血小板诱导肝癌细胞凋亡而抑制HCC的生长。