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鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)是一种人畜共患病肠道致病细菌,可引起肠胃炎、伤寒、痢疾等疾病。由鼠伤寒沙门氏菌引起的病例全球可见,分布广泛,特别是在贫困地区,由其感染造成的发病率和死亡率更是高居不下,给人类生活健康造成极大威胁,而形成细菌菌膜是其感染难以根除的主要原因之一。菌毛是细菌表面的一些丝状附属物,其在病原菌感染机体形成菌膜的初始黏附,菌膜发展甚至细菌间的信号传递等过程中均有重要作用。适配体是能与靶标特异性结合的寡核酸片段,其在靶向给药治疗细菌或细菌菌膜感染等方面有极大应用前景,因此,本文以鼠伤寒沙门氏菌菌毛蛋白为靶标,筛选其特异性适配体,为靶向治疗细菌或细菌菌膜感染奠定基础。此外,为进一步探究菌毛影响菌膜发展的分子机制,以菌毛蛋白为抗原,制备其多克隆抗体。具体工作如下:(1)FimA蛋白是鼠伤寒沙门氏菌Ⅰ型菌毛的主要结构单位,对实现其菌毛的功能有重要意义。本实验通过构建pET-28a-fimA重组质粒,将重组质粒导入表达细菌,并成功诱导表达。经纯化浓缩,得到纯度较高的重组蛋白FimA,用Bradford法测得其浓度为1.594 mg/mL,达到后续实验要求。(2)适配体(Aptamer)是经指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选得到的,与靶标具有高亲和力与特异性结合能力的寡核酸片段。本部分以鼠伤寒沙门氏菌菌毛蛋白FimA为靶标,筛选得到其特异性适配体。经验证分析,筛选得到的适配体对靶标菌具有较强的亲和力,达到29.8±7.88 nM,且具有较好的特异性。(3)本部分以纯化的鼠伤寒沙门氏菌菌毛蛋白FimA为抗原,免疫3只小鼠,得到其多克隆抗体。经间接酶联免疫吸附(ELISA)实验测其抗血清效价,其中两只小鼠抗血清效价达到1:64000,另一只小鼠抗血清效价达到1:32000。此外,用Western blot检验其特异性,结果表明,多克隆抗体特异性较好。