目的:脑出血(intra cerebral hemorrhage,ICH)是临床上常见的脑血管疾病,发病率,病死率和致残率较高,严重威胁人类健康。近年来越来越多的证据表明,免疫因素及炎症反应在脑出血的病理生理中起重要作用,而补体系统激活是脑出血损伤病理机制中重要的因素之一。本实验在目前针灸治疗中风病研究的基础上,结合中、西医关于中风发病机制的新认识,研究补体C3、C4介导的炎症反应在脑出血后补体级联反应中的重要作用以及电针水沟、内关、足三里穴对脑出血模型大鼠补体介导的炎症反应的影响及作用机理。方法:选择健康Wistar大鼠60只(平均体重200-250g),雌雄各半。将大鼠编号,查随机数字表,分为4组:正常组、生理盐水组、模型组和电针治疗组。根据出血时间,正常组、假手术组分别分为3h、24h、72h组,每组2只。模型组、电针治疗组分别分为3h、24h、72h组,每组8只。模型组采用0.4ul胶原酶Ⅶ注射大鼠尾壳核(前囟向后0.2mm,右旁开2.9mm,深6mm)诱导大鼠脑出血的方法。模型组分别于造模后3h、24h、72h时取材。电针组采用电针治疗脑出血模型大鼠,穴取水沟穴、内关穴(双侧)、足三里穴(双侧)。电针3h、24h、72h组分别于造模后即刻针刺一次,然后每过12小时针剌1次,电针3h组共针刺1次,电针24h组共针刺3次,电针72h组共针刺7次。水沟和右侧大鼠耳朵接一对电极,同侧内关和足三里接一对电极,连续波,频率120次/min,强度1mA,每次留针30min。然后分别于造模后3h、24h、72h时取材。以上四组大鼠均用10%水合氯醛腹腔注射麻醉,开胸经升主动脉依次灌入生理盐水100ml、4℃预冷的含4%多聚甲醛的0.01mol/L磷酸缓冲液(PBS.pH7.4)400ml。灌毕取脑,置于4%多聚甲醛溶液过夜后固定。以注射点为中心冠状石蜡切片,片厚5μm,切10片,采用免疫组化法测量大鼠脑组织中补体C3、C4,在400倍高倍镜下随机取血肿周围4个不重叠视野,计数补体C3和补体C4阳性细胞数,统计分析,观察神经缺损行为体征并进行评分。结果1.模型组和电针组在神经行为学评分的比较3h电针组神经行为学评分较3h模型组降低,但无显著性差异(P＞0.05);24h电针组较24h模型组明显降低(P＜0.05),有显著性差异;72h电针组较72h模型组明显降低(P＜0.05),有显著性差异。2.各组脑组织补体C3的表达3h模型组补体C3表达较假手术组无明显变化(P＞0.05),无显著性差异;24h模型组较假手术组明显升高(P＜0.05),有显著性差异;72h模型组较假手术组明显升高(P＜0.01),有非常显著性差异;3h电针组补体C3表达较3h模型组降低(P＞0.05),无显著性差异;24h电针组较24h模型组降低(P＜0.05),有显著性差异;72h电针组较72h模型组明显降低(P＜0.01),有非常显著性差异。3.各组脑组织补体C4的表达3h模型组补体C4表达较假手术组无明显变化(P＞0.05),无显著性差异;24h模型组较假手术组明显升高(P＜0.05),有显著性差异:72h模型组较假手术组明显升高(P＜0.01),有非常显著性差异;3h电针组补体C4表达较3h模型组降低,无显著性差异(P＞0.05);24h电针组较24h模型组降低(P＜0.05),有显著性差异;72h电针组较72h模型组明显降低(P＜0.01),有非常显著性差异。4.脑出血后3h、24h、72h血肿周围脑组织补体C3、C4表达相关性分析脑出血后24h、72h血肿周围脑组织补体C3、C4表达呈正相关关系,而脑出血后3h补体C3、C4表达呈负相关关系。结论:1.补体系统激活参与了脑出血后炎症反应,可能是脑出血损伤的一个重要因素之一。2.补体成分C3、C4在脑出血模型大鼠脑组织中的变化具有动态一致性。3.电针水沟、内关、足三里能改善脑出血大鼠的神经缺损行为体征。4.24h电针组、72h电针组的治疗效果比3h电针组的治疗效果好,可能是3h时补体系统激活机制尚未启动所致,而24h电针组、72h电针组明显降低脑出血模型大鼠脑组织中补体C3、C4的含量,说明急性脑出血早期电针治疗能有效减轻炎症反应,从而达到减轻急性脑出血后脑水肿的作用。