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目的探讨Bruton酪氨酸激酶(BTK)抑制剂依鲁替尼(Ibrutinib)和CD20单克隆抗体利妥昔单抗(Rituximab)单药及联合应用对套细胞淋巴瘤细胞系JeKo-1增殖的影响。方法(1) JeKo-1细胞增殖实验:培养JeKo-1细胞株,取生长状态良好的细胞,用细胞计数法绘制细胞生长曲线。(2)Ibrutinib和Rituximab单药应用实验:设Ibrutinib实验组、Rituximab实验组、自身对照组和空白对照组;实验组为分别用6种不同浓度的Ibrutinib或5种不同浓度的Rituximab培养JeKo-1细胞,自身对照组为正常JeKo-1细胞,空白对照组为无细胞的培养液。各组分别培养24h、48h、72h后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,计算细胞存活率及抑制率,组间差异采用单因素方差分析,使用GraphPad Prism 5软件分析半数抑制浓度(IC50)。(3)Ibrutinib及Rituximab联合应用实验:设Ibrutinib单药组、Rituximab单药组、Ibrutinib+Rituximab联合组、自身对照组和空白对照组;单药组分别用4种不同浓度的Ibrutinib (10.1μmol/L、13.1μmol/、17.0μmol/L、 22.1μmol/L)或Rituximab (59.1lg/ml、76.9μg/ml、100.0μg/ml、130.0μg/ml)培养JeKo-1细胞,联合组分别用4种对应浓度的Ibrutinib和Rituximab共培养JeKo-1细胞,自身对照组和空白对照组处理方法同上。培养72h后采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,计算细胞存活率及抑制率,使用CompuSyn软件分析并判断两药合用的效应及联合指数。结果(1)正常JeKo-1细胞的生长曲线显示该细胞2-3天达对数生长期,第3天后进入生长平台期。(2)随着Ibrutinib浓度升高,在培养后24h、48h、72h各时间点,JeKo-1细胞存活率均显著下降(均为P<0.001);随着培养时间延长,各Ibrutinib浓度组的JeKo-1细胞存活率均显著下降(均为P<0.05)。Ibrutinib对JeKo-1细胞作用72h的IC50为17.11μmol/L。(3)随着Rituximab浓度升高,在培养后72h时,JeKo-1细胞存活率显著下降(P=0.015),但在24h和48h时细胞存活率的改变无显著差异(P>0.05);随着培养时间延长,Rituximab 50ug/ml、100μg/ml和250μg/ml浓度组的JeKo-1细胞存活率均显著下降(P==0.033、P=0.011和P=0.029),但Rituximab 1μg/ml和25μg/ml浓度组的细胞存活率改变无显著差异(P>0.05)。(4) Ibrutinib和Rituximab按17μmol/L:100μg/ml的比例联合作用于JeKo-1细胞72h,联合指数CI值范围在0.9~1.1之间,提示两药联合效应为相加作用。结论(1) Ibrutinib单药对MCL细胞系JeKo-1具有浓度依赖和时间依赖的增殖抑制作用,且其增殖抑制作用明显;(2) Rituximab单药对MCL细胞系JeKo-1具有浓度依赖和时间依赖的增殖抑制作用,但其增殖抑制作用不明显(未达到10%);(3) Ibrutinib和Rituximab联合应用于JeKo-1细胞显示相加作用,无协同或拮抗作用。