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羊口疮病毒又叫羊传染性脓疱病病毒(ORFV),该病毒属于痘病毒科副痘病毒属病毒。羊口疮病毒具有较强的传染性,主要感染绵羊和山羊等反刍动物。近年来,逐渐有报道该病毒也可感染鹿、松鼠等野生动物。世界各国和地区都有该病的报道,对养羊业造成较大危害和经济损失。除了疫苗接种外,该病尚未找到有效的治疗手段,使用较多的疫苗是弱毒苗和灭活苗,二者在一定程度上能够预防羊口疮病,但存在病毒毒力返强、病毒变异等问题,效果并不理想,因此有必要找到更加有效的措施防范该病毒的传播及危害。从中国安徽省亳州市某羊场采集疑似羊口疮病口腔结痂病料,利用Hela细胞进行病毒分离培养,根据NCBI上已公布的ORFV B2L基因序列,设计一对特异性引物,对特异性B2L基因进行PCR扩增并送至生物公司测序,与已发表的其他毒株进行序列比对,并构建遗传进化树,确定基因进化关系。将该基因克隆至原核表达载体pET-32a中,构建原核表达载体pET-32a-B2L,转化至大肠埃希菌BL21中,经IPTG诱导后,用SDS-PAGE及Western blot检测目的蛋白及反应原性,蛋白纯化后,注射小鼠,制备多克隆抗体保存备用。结果显示,将该病毒接种到Hela细胞后,3~4天产生细胞病变,细胞表现为脱落、圆缩等特征;PCR显示,在1137bp处有一明显的特异性条带,与目的片段长度一致,与参考序列比对,同源性达到99%,系统发育进化树表明该分离株与辽宁分离株HQ694773的亲缘关系最近,说明成功分离到一株羊口疮病毒,将其命名为ORFV-AH分离株。本试验成功表达了B2L重组蛋白,该蛋白以包涵体形式存在,SDS-PAGE分析表明蛋白约为55kDa,最佳诱导条件为温度37℃、时间4h,IPTG终浓度为1mmol/L,Western blot分析表明表达产物具有良好的免疫活性。本试验提供了一种羊口疮病毒的检验方法,为安徽省羊口疮病毒的防控提供了技术支撑。