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紫杉醇(Taxol)是一种复杂的具有抗癌活性的二萜类化合物,最初是从太平洋短叶红豆杉(Taxus brerifolia)的树皮中提取出来的[1]。紫杉醇以其独特的抗癌机理得到世界各国研究人员的重视,相继被证明对卵巢癌、子宫癌、乳腺癌等十几种癌症具有很强的疗效[2—4],目前已作为乳腺癌、卵巢癌和非小细胞肺癌的临床一线用药,在临床上对卵巢癌的有效率为30%,对转移性乳腺癌的有效率为48%。按照每年将死亡的卵巢癌患者数预计,每年将需要20-25kg紫杉醇来满足这些患者的治愈需要。目前市售的紫杉醇药品主要是从红豆杉属植物的茎皮中分离获得,由于红豆杉是世界濒危级植物,资源极度短缺,且树皮中紫杉醇的含量仅为0.0l%,提取分离难度颇大,因此更加增大了日益增长的紫杉醇供应的危机[5]。 近年来,对红豆杉属植物的研究主要集中在寻找和扩大新药源上。本实验所使用的红豆杉枝叶提取物HHO3是一种从东北红豆杉枝叶醇提粗浸膏中经过一系列纯化工艺得到的中药活性部位样品,已分离出20个化合物,并对其中12个化合物鉴定了结构。经分析,HHO3中紫杉醇含量较少,多为紫杉烷类二萜化合物。本实验是用红豆杉枝叶提取物HHO3研究其抗肿瘤作用及机制。 本实验分以下几部分进行: 第一部分:红豆杉枝叶提取物HHO3抗肿瘤作用的研究 体外抗肿瘤活性采用MTT法检测了HHO3对多种肿瘤细胞的抑制率,并与紫杉醇对比,-结果发现HHO3与紫杉醇的抗瘤谱基本相同,且呈明显量效关系和时间依赖关系。 体内抗肿瘤活性采用4种常规小鼠移植性肿瘤模型(S180,B16,Lewis,colon26)来研究,结果发现HHO3高剂量组对小鼠S180肉瘤、小鼠B16黑色素瘤、小鼠lewis肺癌和小鼠colon26结肠癌的抑瘤率分别达到了74.14%、54.2%、69.27%、55.39%,高于阳性对照紫杉醇;与模型对照组相比,荷瘤小鼠的体重下降明显低于紫杉醇,说明HHO3在抑瘤率较高的情况下,毒性明显小于紫杉醇,安全系数较高。 第二部分:红豆杉枝叶提取物HHO3抗肿瘤作用的机制研究 通过Wright’s染色、荧光染色、原位末端标记和流式细胞仪测试等实验发现HHO3可以诱导细胞凋亡,对其细胞周期进行分析,发现HHO3将细胞明显阻滞于G2/M期,此结果与紫杉醇相似。