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研究背景
肺癌是世界上发病率和死亡率均居前位的癌症疾病，腺癌为最常见的肺癌病理类型。由于肺癌极易通过淋巴结和血运转移，首次诊断即为转移性癌的肺癌患者比例达57％，而这部分患者的五年生存率只有5％，因此，早期诊断和治疗对于改善患者预后有极重要的作用。分子肿瘤学的研究可以帮助医务工作者更好的理解肿瘤的癌变机制，促进分子诊断的进步，也为寻找肿瘤治疗靶点提供思路。
PPP4R3A又名SMEK1，是蛋白磷酸酶4(PP4)的调节亚基3A，2005年，研究者们从PP4复合物中分离得到并将其命名为PPP4R3A，并且发现其酵母菌同源基因Psy2表达的蛋白敲除后对顺铂有高度敏感性，提示PPP4R3A具有肿瘤耐药机制。同期的一篇研究报道，研究者们发现在拟南芥中该基因具有抑制MAPK通路中MEK功能的作用，因此起名为SMEK1。PPP4R3A在体内多种组织器官中广泛表达，参与细胞分裂，节律调节，神经发生等多个过程。在本研究中，我们探究PPP4R3A在肺腺癌中表达，功能及其相关调控机制研究。
研究目的
本研究检测PPP4R3A在人的肺腺癌组织中的表达，探究PPP4R3A在肺腺癌发生发展中的作用和机制。
研究方法
1.74例肺腺癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织IHC染色检测PPP4R3A表达量的高低，并且分析表达量的高低与患者生存周期和肿瘤分期的相关关系。
2.构建高表达和敲低PPP4R3A的质粒，用质粒转染H1975细胞和A549细胞，构建高表达和敲低PPP4R3A的细胞系，检测细胞增殖，迁移，侵袭能力的改变
3.在裸鼠背部皮下注射稳定敲低PPP4R3A的A549细胞，观察皮下肿瘤生长速度、肿瘤的体积和重量与对照组的差异。肿瘤用甲醛固定，包埋，切片，进行CD31免疫荧光染色，观察肿瘤内的血管形成情况。
4.实时定量PCR检测PPP4R3A的表达量改变后，Wnt-β-catenin信号通路主要分子β-catenin和下游靶基因C-MYC，C-JUN，CyclinD1，AXIN2在转录水平上的改变。
研究结果
1.免疫组织化学检测74例肺腺癌组织以及癌旁组织中PPP4R3A的表达水平。结果显示，PPP4R3A在＞90％的肿瘤样本中呈阳性染色，而癌旁染色呈阴性或弱阳性，PPP4R3A主要定位于癌细胞的细胞核中，没有观察到PPP4R3A的表达量在不同的肿瘤分期和患者的生存周期中存在差异。
2.CCK-8检测发现PPP4R3A敲低的两种肺腺癌细胞的生长速度下降，过表达PPP4R3A的细胞生长加速。Transwell分析显示，PPP4R3A敲低后，迁移和侵袭的细胞数量减少，过表达PPP4R3A的细胞迁移和侵袭数量增加。
3.稳定敲低PPP4R3A细胞的皮下肿瘤生长速度比注射对照组的肿瘤慢得多。敲低PPP4R3A的细胞所形成的肿瘤重量轻于对照组，体积小于对照组。血管内皮细胞标记物CD31的免疫荧光染色显示稳定敲低PPP4R3A的细胞异种移植瘤中形成的成熟血管少于对照，且血管杂乱，形态不完整。
4.PPP4R3A敲低后，β-catenin及其下游靶基因C-MYC，C-JUN，CyclinD1，AXIN2的mRNA表达量降低，PPP4R3A高表达后，β-catenin及其下游靶基因C-MYC，C-JUN，CyclinD1，AXIN2的mRNA表达量增高。
结论
PPP4R3A在肺腺癌组织中的表达水平高于癌旁对照组织，PPP4R3A具有促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的能力，PPP4R3A促进肿瘤生长，促进瘤体内的血管形成。PPP4R3A促进Wnt-β-catenin信号通路的激活。
肺癌是世界上发病率和死亡率均居前位的癌症疾病，腺癌为最常见的肺癌病理类型。由于肺癌极易通过淋巴结和血运转移，首次诊断即为转移性癌的肺癌患者比例达57％，而这部分患者的五年生存率只有5％，因此，早期诊断和治疗对于改善患者预后有极重要的作用。分子肿瘤学的研究可以帮助医务工作者更好的理解肿瘤的癌变机制，促进分子诊断的进步，也为寻找肿瘤治疗靶点提供思路。
PPP4R3A又名SMEK1，是蛋白磷酸酶4(PP4)的调节亚基3A，2005年，研究者们从PP4复合物中分离得到并将其命名为PPP4R3A，并且发现其酵母菌同源基因Psy2表达的蛋白敲除后对顺铂有高度敏感性，提示PPP4R3A具有肿瘤耐药机制。同期的一篇研究报道，研究者们发现在拟南芥中该基因具有抑制MAPK通路中MEK功能的作用，因此起名为SMEK1。PPP4R3A在体内多种组织器官中广泛表达，参与细胞分裂，节律调节，神经发生等多个过程。在本研究中，我们探究PPP4R3A在肺腺癌中表达，功能及其相关调控机制研究。
研究目的
本研究检测PPP4R3A在人的肺腺癌组织中的表达，探究PPP4R3A在肺腺癌发生发展中的作用和机制。
研究方法
1.74例肺腺癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织IHC染色检测PPP4R3A表达量的高低，并且分析表达量的高低与患者生存周期和肿瘤分期的相关关系。
2.构建高表达和敲低PPP4R3A的质粒，用质粒转染H1975细胞和A549细胞，构建高表达和敲低PPP4R3A的细胞系，检测细胞增殖，迁移，侵袭能力的改变
3.在裸鼠背部皮下注射稳定敲低PPP4R3A的A549细胞，观察皮下肿瘤生长速度、肿瘤的体积和重量与对照组的差异。肿瘤用甲醛固定，包埋，切片，进行CD31免疫荧光染色，观察肿瘤内的血管形成情况。
4.实时定量PCR检测PPP4R3A的表达量改变后，Wnt-β-catenin信号通路主要分子β-catenin和下游靶基因C-MYC，C-JUN，CyclinD1，AXIN2在转录水平上的改变。
研究结果
1.免疫组织化学检测74例肺腺癌组织以及癌旁组织中PPP4R3A的表达水平。结果显示，PPP4R3A在＞90％的肿瘤样本中呈阳性染色，而癌旁染色呈阴性或弱阳性，PPP4R3A主要定位于癌细胞的细胞核中，没有观察到PPP4R3A的表达量在不同的肿瘤分期和患者的生存周期中存在差异。
2.CCK-8检测发现PPP4R3A敲低的两种肺腺癌细胞的生长速度下降，过表达PPP4R3A的细胞生长加速。Transwell分析显示，PPP4R3A敲低后，迁移和侵袭的细胞数量减少，过表达PPP4R3A的细胞迁移和侵袭数量增加。
3.稳定敲低PPP4R3A细胞的皮下肿瘤生长速度比注射对照组的肿瘤慢得多。敲低PPP4R3A的细胞所形成的肿瘤重量轻于对照组，体积小于对照组。血管内皮细胞标记物CD31的免疫荧光染色显示稳定敲低PPP4R3A的细胞异种移植瘤中形成的成熟血管少于对照，且血管杂乱，形态不完整。
4.PPP4R3A敲低后，β-catenin及其下游靶基因C-MYC，C-JUN，CyclinD1，AXIN2的mRNA表达量降低，PPP4R3A高表达后，β-catenin及其下游靶基因C-MYC，C-JUN，CyclinD1，AXIN2的mRNA表达量增高。
结论
PPP4R3A在肺腺癌组织中的表达水平高于癌旁对照组织，PPP4R3A具有促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的能力，PPP4R3A促进肿瘤生长，促进瘤体内的血管形成。PPP4R3A促进Wnt-β-catenin信号通路的激活。