【摘 要】
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为了解宁夏中南部各地区的肉牛规模场、屠宰场、交易市场中牛支原体感染流行情况及代表菌株,本试验采用间接ELISA方法对来自宁夏中南部9个县区不同场点的765份血清样本进行牛支原体抗体的检测;建立了特异性强、灵敏度高的牛支原体PCR诊断方法,并对495份牛鼻拭子样本进行PCR检测;分离鉴定了菌株,同时对分离株进行了药敏实验。结果如下:1.设计两对引物,分别为P1:牛支原体16S rRNA通用引物和P2
【基金项目】
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宁夏重点研发计划现代农业科技创新示范区专项（2019BBF02005）； 宁夏动物疫病净化科技创新团队项目；
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为了解宁夏中南部各地区的肉牛规模场、屠宰场、交易市场中牛支原体感染流行情况及代表菌株,本试验采用间接ELISA方法对来自宁夏中南部9个县区不同场点的765份血清样本进行牛支原体抗体的检测;建立了特异性强、灵敏度高的牛支原体PCR诊断方法,并对495份牛鼻拭子样本进行PCR检测;分离鉴定了菌株,同时对分离株进行了药敏实验。结果如下:1.设计两对引物,分别为P1:牛支原体16S rRNA通用引物和P2:牛支原体oppF基因特异性引物,通过优化体系和反应条件,成功扩增出大小为858 bp和1914bp目的片段,建立了特异性强、灵敏度高的牛支原体PCR检测方法。2.在765份血清样本中,经ELISA检出牛支原体抗体阳性样本170份,总体阳性率为22.22%;9个县区的牛支原体抗体阳性率为9.41%～35.29%,规模场、屠宰场、交易市场的牛支原体抗体阳性率分别为19.44%、34.44%和25.19%;犊牛牛支原体抗体阳性率为27.64%,成年牛为19.65%。495份鼻拭子样本中,经PCR检出牛支原体阳性59份,总体阳性率为11.92%;9个县区的牛支原体阳性率为1.82%～21.82%,规模场、屠宰场、交易市场的牛支原体阳性率分别为11.11%、13.33%、12.59%;犊牛牛支原体阳性率为15.45%,成年牛为10.91%。3.本试验成功分离出4株牛支原体,分别命名为NZ-1、NZ-2、NZ-3、NZ-4,对这4株菌株分别用牛支原体16S rRNA引物和oppD/F基因特异性引物进行PCR鉴定,结果发现都可以扩增出牛支原体特异性片段;利用MEGAX软件进行序列比对,用N-J法对4个菌株16S rRNA序列和支原体代表菌株序列建立系统发育树,结果显示4株菌株与宁夏株Ningxia-1、国际标准菌株PG45亲缘关系最近,证明所分离的菌株为牛支原体菌株。对分离培养的宁夏中南部地区牛支原体菌株进行药敏试验,药敏结果表明对卡那霉素、恩诺沙星、泰妙菌素、林可霉素、庆大霉素和土霉素高度敏感,提示这些药物可用于牛支原体感染的临床治疗。
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