香椿子(Seeds of Toonan siensis),是楝科植物香椿[Toona sinensis(A.Juss.)M.Roem]的果实,一般于秋季采摘,晒干后可用作药材使用。在香椿子的多种活性成分中,其所含有的多糖是一种重要的活性物质。本文以香椿子为原材料,研究了香椿子多糖的提取工艺、分离纯化、理化性质及其纯化后的香椿子多糖组分的体外抗凝血活性。主要研究内容包括以下方面:1.香椿子粗多糖提取工艺优化采用热水提取法提取香椿子粗多糖,通过响应面软件(Design expert 8.60)优化多糖提取条件,结果得到最优的提取工艺条件为:提取温度82.5℃,提取时间92 min,料液比1:25 g/mL。香椿子粗多糖在此工艺条件下进行提取后,其得率达到5.08%。2.香椿子多糖的分离纯化实验采用Sevag、TCA(三氯乙酸)和聚酰胺法三种方法对香椿子粗多糖进行脱蛋白,并把三种实验方法的脱蛋白效果进行了比较。综合蛋白质去除率和多糖保留率2个方面考虑,结果发现,最好的脱蛋白方法是聚酰胺法,其蛋白质去除率达68.15%,多糖保留率达88.09%;选用活性炭除去香椿子多糖(已脱蛋白)中的色素,实验通过正交试验设计L9(34)研究了活性炭用量、脱色温度、脱色时间和pH对多糖脱色效果的影响,获得的最优脱色条件为:活性炭用量为2.0%,脱色温度60℃,脱色时间为1h,pH为4,此条件下香椿子多糖色素的去除率达64.58%,多糖保留率为80.23%。脱蛋白、脱色后的香椿子多糖(STSP)通过DEAE Sepharose CL-6 阴离子交换柱层析法进一步纯化,结果得到 4 个组分,分别是STSP-1、STSP-2、STSP-3 和 STSP-4,其得率分别为 13.3%、10.38%、25.12%和26.39%,总回收率为75.19%。3.香椿子多糖的理化性质对纯化后的香椿子多糖组分结构进行初步分析。紫外光谱(UV)分析表明STSP-1、STSP-2、STSP-3和STSP-4中都没有检测到蛋白质及核酸的存在。红外光谱(FT-IR)显示香椿子多糖的4个组分图谱相似,皆是多糖类化合物。经高效凝胶过滤色谱(HPGFC)检测,STSP-2、STSP-3皆为单峰,为均一多糖,且STSP-2和STSP-3的重均分子量分别为21.4 kDa和43.7 kDa。经离子色谱测定,STSP-1由鼠李糖(Rha)、氨基葡萄糖(GluN)、半乳糖(Gal)和木糖(Xyl)组成;STSP-2主要由半乳糖(Gal)、葡萄糖(Glu)组成;STSP-3主要由鼠李糖(Rha)、半乳糖(Gal)组成;STSP-4主要由阿拉伯糖(Ara)、鼠李糖(Rha)和半乳糖(Gal)组成。扫描电镜(SEM)结果表明,STSP-1主要呈方块状晶体结构,表面比较光滑;STSP-2为片状结构,表面较为粗糙;STSP-3为颗粒不均匀的圆球状,表面结构较为紧实;STSP-4主要为长棒状结构。刚果红实验表明,STSP-2和STSP-3具有三股螺旋结构,STSP-1和STSP-4不具有三股螺旋结构。4.香椿子多糖的体外抗凝血活性以活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)作为体外抗凝血活性的检测指标,将肝素钠(阳性)和生理盐水(阴性)作为参照,对香椿子多糖及其组分的抗凝血作用进行了研究。结果显示,与阴性对照生理盐水相比,香椿子多糖及其组分对APTT基本没有影响,说明其不是通过内源性途径影响凝血系统;而香椿子多糖及其组分可以延长TT时间,并且STSP-3能显著延长PT和TT,当STSP-3的浓度为4 mg/mL时,其分别延长了 27.36%和60%,说明其能够通过外源性、共同途径来影响凝血过程。