蓝舌病病毒(BTV)隶属于呼肠孤病毒科环状病毒属,该病毒的基因组由10个线性化的双链RNA基因节段组成。BTV主要通过吸血昆虫传播,多种家养和野生反刍动物易感染。该病毒在世界上的大部分地区和国家存在,并对农业生产以及进出口贸易产生不利影响。目前用来拯救蓝舌病病毒的反向遗传技术主要依赖于利用病毒基因组节段的互补DNA(cDNA),体外合成RNA转录物,在辅助质粒的帮助下拯救病毒。其中RNA的合成过程是一个费力复杂的工作,需要昂贵的试剂和小心的操作程序,并且RNA极易降解。另外,该技术需要把目的基因克隆到特定的载体中,用作RNA转录的模板。本研究建立了一种基于PCR产物的拯救BTV的两步转染法反向遗传技术。该方法通过在BSR细胞中,首先转染表达BTV的VP1、VP3、VP4、VP6、VP7、NS1、NS2蛋白的7个辅助质粒,再转染BTV的10个基因节段的PCR产物即可拯救出BTV。接着对该反向遗传技术进行了验证,利用该技术成功拯救出一株BTV骨架毒和三株节段重组的重组BTV,然后对拯救病毒进行鉴定。并优先绘制野生毒wtBTV1、拯救的骨架毒rBTV1和重组病毒rBTV1s2的生长曲线,对其增殖特性进行了比较。最终发现整合了外源基因节段S2的重组病毒比其它两株病毒的生长速度慢。本方法省去了合成RNA的步骤,且目的基因不是必须要克隆到特定载体作为RNA转录的模板。该技术有望替代传统的BTV拯救方法,或者作为经典方法的有益补充。此外,该反向遗传方法可为建立或优化其它的环状病毒属病毒反向遗传技术提供参考。